亚胺离子在LC%2fMS%2fMS法测定血浆中含有内环的小分子肽方面及应用.pdfVIP

·34· 筮蕴旦全垦垫堑塑丝堂昱塑垡逝堂鲞金这 亚胺离子在LC／MSIMS法测定血浆中含有内环的小分子肽方面的应用 陈芸¨，王策2，俞颖1 02472 1南京医科大学，南京2100凹，江苏；2BmntaPIl脚m掰面cals，lne．，USA Xterra 摘要由于三氮串联四极杆质谱仪中存在的碰撞级联或多重 ILP8柱(5伽，2．1舢×50 裂解会导致测定)呔类物质的灵敏度降低。因此该仪器在此方 (0．1％甲酸：水)和S(O．1％甲酸：乙腈)的流速保持在0．6ml／ 面的应用较少。然而。一种含有链内二硫键的小分子肽类药 物加压素／抗利尿激素(vasopressin)能产生一种不同于以往的 裂解模式。研究发现，加压素含有6个氨基酸的内环在进行 5％B；2．2min：95％A一5％B。柱温，室温。加压素和磺胺丁脲 二级质谱分析时会发生剧烈的化学键断裂。生成大量结构特 保留时间分别为0，81和1．38min。进样量加uL。为避免样品 殊的亚胺碎片离子。本文旨在深入探讨这些亚胺离子的产生 遗留(carrvover)，每次进样前注射器和针头分别用针头清洗液 A(二甲基亚砜：甲醇为10：90)清洗两次，针头清洗液B(乙腈： 规律及其在I_E／MS／MS法测定生物基质中多肽分子方面的应 用价值。 异丙醇：水为50：30：20)清洗一次。用于定量分析的离子为：加 关键词小分子肽(寡肽)；亚胺离子；三级串联四极杆质谱 仪；液相色谱．串联质谱法(Ic，Ms，MS) 测，DP电压：105V，CE电压：98eV，驻留时间200ms。 1．3储备液的制备、校正与标准对照溶液、质控标准品的配 液相色谱．串联质谱法是一种高灵敏度、高选择性的化合 制 同时精密称定两份加压素，分别溶解于工作溶剂中制成 物定量测定分析方法。然而，肽类物质作为一类正在迅速发 浓度均为lm∥ml的储备液1和2，于棕色玻璃管中一20℃避 展的重要药物和生物标记物，却为质谱准确地识jJJl／鉴定其产 光保存。另用工作溶剂将每份储备液进行1000倍稀释后分别 生的基峰离子／碎片离子带来了挑战。尽管已有人应用离子 制得3份样品，将总的6份样品注入质谱仪进行检测，根据储 2|，但是目前应用最为广泛 阱质谱仪对肽类物质进行了研究【l’1 备液1和2各自的3份样品的峰面积分别求出平均值，将两个 的三级串联四极杆质谱仪在肽类物质的应用却少有报道。这 平均峰面积值进行比较，目的是保证储备液1和2的差异性小 主要是由于与离子阱的一步裂解相比，三级串联四极杆质谱 于5％。精密称定内标物磺胺丁脲，用甲醇稀释制成Img／nfll 仪的碰撞级联或多莺裂解会使碎片离子在碰撞中进一步解 的储备液。用工作溶剂连续稀释储备液1制成浓度为0．20， 离，从而产生强度相对较小却数目巨大的碎片离子拉j。这就 直接导致目标离子的检测强度降低，从而使方法的灵敏度减 准工作液，一20℃冰箱保存备用。实验时，从每份标准工作液 弱。 中取出lO皿加入到990止的空白血浆中，配成最终浓度为 本文以加压素为例，介绍了含有内环的小分子肽在三级 串联四级杆质谱仪中产生大虽、亚胺碎片离子的一种特殊的裂 样。用储备液2制成浓度为2．∞，6．00，50．0和800n∥IIll质控