环境荷尔蒙物质邻苯二甲酸环己二酯的荧光免疫分析的研究.pdfVIP

第24卷增刊 分析试验室 Vol.解.suppl. 2005年 10月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 2005一10 环境荷尔蒙物质邻苯二甲酸环己二醋的 荧光免疫分析研究 郎 庆，张明翠，王琼娥，庄惠生’ (东华大学环境科学与工程学院，上海200051) 邻苯二甲酸醋(PhthalicAcidEstersPAEs)是一 抗体包被时，以抗体和标记抗体做方阵确定包 类普遍使用的化学工业品[[I]。由于邻苯二甲酸醋 被抗体和标记抗体的浓度。在抗体浓度10一60 类化合物的大量生产与广泛应用，这类化合物已 4ML 范围时，荧光值随着抗体的浓度增大而增 大量地进人环境，极为普遍地存在于土壤、底泥、水 大;而在60一100留ML时荧光值几乎没有变化。 体、生物、空气及大气沉降物等环境样品之中[[2,31a 因此选择抗体包被浓度为60闻ML. 动物实验表明这类化合物具有致突、致畸活性，某 2.2pH的影响 些邻苯二甲酸醋(尤其是邻苯二甲酸环己二醋)表 在中性条件下，检测的灵敏度最高，pH值偏酸 现出了致癌活性[[4]，并被确认为环境荷尔蒙类物 或偏碱时，检测的灵敏度都降低，且酸性条件对检 质。为此，世界各国的有关部门及科学家已对邻苯 测的灵敏度影响最大。因此在实际样品测定时，要 二甲酸醋类有机污染物的环境公害引起特别关注。 调整样品的声值，减少pH值对检测结果的影响。 目前采用气相色谱法和液相色谱法测定邻苯二甲 本实验选择的是pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液。 酸醋类的研究较多，这些方法或灵敏度不高，或设 2.3 温育温度和时间的影响 备昂贵。用荧光免疫法法测定醋类的研究还未见 在固相载体包被时，4℃过夜的效果较37℃ 报道。本文使用自制的抗邻苯二甲酸环己二醋抗 温育2一3h的好。在进行抗原抗体反应时，37℃ 体作为一抗，MC荧光标记山羊抗兔I吩为二抗， 条件下，开始反应的2h反应迅速，随后反应速度 研究并建立了环境荷尔蒙物质邻苯二甲酸环己二 减缓。4h后再延长反应时间，结合复合物的荧光 醋的双抗体夹心荧光免疫分析方法。 值几乎不再变化。所以，本实验选择抗原抗体反应 1 实验方法 时间为2ho 用包被缓冲液稀释一抗储备液至60闻ML，用 3 标准曲线的绘制 微量加样器移取，每孔滴入100ML，放人冰箱中4 在最佳实验条件下，DCHP在10-，一10- ℃过夜;次日，将酶标板从冰箱中取出，倒掉孔内的 蒯rn1浓度范围内与荧光强度有良好的线性关系。 一抗残留液，然后用PBST洗涤液洗涤3一4次，每 线性回归方程为I二0.0955c+0.0017(I为抑制 次3min，然后除去洗涤液;用微量加样器移取1% 率，C为DCHP的浓度)，相关系数 r二0.9985。对 ’的OVA溶液于每孔中150汕，放置0.5h;封闭完 质量浓度为10-3pg/ML的DCHP进行了11次平行 毕，用PBST洗涤液再次洗涤。然后，在酶标板各 测定，得到该法的相对标准偏差为3.08%。根据 孔中加人待测样品，每孔100汕,37℃温育2h，洗 IUPAC的建议，计算得到检出限为0.5ng/mL. 涤;向酶标板各孔中加人100汕荧光标记抗抗体， 4 交叉反应 37℃温育2h，洗涤，最后用FLX800荧光酶标仪 用荧光免疫分析法测定邻苯二甲酸环己二醋 (BIO-TEK/Nstnmients.NIC)测定。 结构类似物4一硝基邻苯二甲酸环己二醋、4-氨基 2 结果与讨论 邻苯二甲酸环己二醋、邻苯二甲酸二甲醋、邻苯二 2.1包被液浓度的选择 甲酸二乙醋、邻苯二甲酸二丙醋、邻苯二甲酸丁醋、 基金项目:国家自然科学基金资助项目(2