泌尿生殖道支原体感染男性不育病人精子DNA链损伤分析及应用.pdfVIP

主兰!堕垫兰全笙±二星曼型兰查奎全堡塞叁 泌尿生殖道支原体感染男性不育病人精子DNA链损伤分析及应_用 陈建伟1，崔云2，张晓霞1，夏晴晴1 (1．浙江中医药大学附属宁波市中医院男科实验室；3．浙江中医药大学附属宁波市中医院男科；浙 江省宁波市315012) 摘要： 【目的】探讨泌尿生殖道支原体感染男性不育病人精子DNA链损伤及其应用意义。【方法】对 前后的精子DNA损伤情倪。【结果】病人组的精子DNA碎片化指数(DNAfragmentation 病人治疗前后的精子密度、活动率比较，差异不大，没有统计学意义；病人治疗后的精子畸形率明显减少， 差异有统计学意义，PO．05。【结论】泌尿生殖道支原体感染男性不育病人的精子DNA损伤明显高于健 康生育男性，相应抗生素治疗可以降低感染造成的精子DNA损伤，精子DNA完整性分析在支原体感染不育 男性诊疗中比精液常规参数检测更为有价值。 关键词：支原体；男性不育；精子DNA链损伤；精子染色质扩散试验 男性不育的致病因素多种，其中泌尿生殖道支原体感染是其中一个重要因素。泌尿生殖道支原体感染 与男性的前列腺炎、附睾炎密切相关，是造成不孕不育症的重要原因…。支原体对精子的常规参数与生育 能力有负面影响，但其潜在的影响机制还未明确。根据我们临床工作经验及相关文献报道，抗感染治疗后 的精液常规参数与治疗前改变不明显，对于治疗效果的评估意义不大。因此，我们需要寻找一种更加敏感 的指标来监测抗感染的疗效。有研究称解脲支原体感染可造成生殖道吞噬细胞增多，吞噬细胞在吞噬异物 熟。精子的DNA完整性不仅与自然受孕密切相关，并且对人工受精、胚胎、婴儿乃至成人的发育也是至关 重要的n1。本研究用精子染色质扩散试验检测了79例泌尿生殖道支原体感染病人和正常生育男性的精子 DNA完整性，探讨泌尿生殖道支原体感染对精子DNA完整性的影响及其作为男性不育抗支原体感染治疗疗 效评估的应用意义。 材料与方法 实验对象： (1)病人组：79例在本院男性科拟诊为男性不育患者，并伴有泌尿生殖道支原体感染， 经检查未见睾丸、染色体、激素及精神异常，无性功能障碍，年龄25—41岁，平均为30．7岁。(2)对照 在79例支原体感染病人组中随机选取32例病人进行培养敏感的抗生素治疗，并在二个月后采样。本实验 经医院伦理委员会同意批准。 仪器与试剂：OLYMPUS Halosperm精子DNA碎片检测试剂购自西班牙。其余试剂均为国产分析纯试剂。 精液常规分析：禁欲48-72小时，手淫法留取精液予无菌的广口容器中，立即放置于37℃恒温箱内， 30rain后按照WHO《人类精液及精子一宫颈黏液相互作用试验室检验手册》瞄1和《世界卫生组织男性不育 标准化检查与诊疗手册》的标准进行各项精液参数检测。正常精液指标参数：液化时间少于60min，精液 量大于2 支原体检测：支原体试剂盒由珠海迪尔生物工程有限公司提供，所用方法严格按操作说明进行。在36 ℃孵箱培养，在24小时和48小时分别观察结果，清晰透明红色为阳性，可以分离培养出解脲脲原体和人 性支原体，同时判断出药敏结果。根据药敏结果分别选择大环内酯类、喹诺酮类和四环素类抗生素进行治 疗。 精子染色质扩散试验：Halosperm精子DNA碎片检测实验步骤：(1)用PBS调整精子密度至～i0× 106／ml； (3) (2)把琼脂糖管放入90-100℃水浴箱5min，至琼脂糖凝胶溶解，或者放入微波炉溶解； u 加入60ul精液标本到琼脂糖管中重悬浮； (4)取20l混合物于载玻片上，盖上盖玻片，放4℃冰箱 基金项目：浙江省中医药科技计划项目2010ZAll0， 宁波市科技计划项目2010C91040 136 一l“HlIⅨ药学会第十描科学术^会恐女排 4min；(5)从冰辅拿…米后轻轻滞掉盖玻片，小监碰掉胶，尽快放八变性液中，帘温孵付7min．(6)带 r手套用川片辅助把破片取}H，保持水平放入兄个盛冉10ⅢI裂解液的托珊中孵奇25mIn；(7)敬出玻 染色：用瑞J．染激和PBS缓冲液l：l 来水轻