免疫细胞化学染色在细胞病理学诊断中应用.pdfVIP

免疫细胞化学染色在细胞病理学诊断中的应用 刘岩田新霞方伟岗 作者单位： 100191，北京大学医学部病理学系 通信作者：刘岩，E-mail：laylaly@126．com 【摘要】目的胸水和支气管肺泡灌洗液的常规离心涂片细胞学诊断阳性率有待提 高，更灵敏的检测指标和更简便可靠的检测方法是提高诊断准确性的关键。方法选择 100例胸水和23例支气管肺泡灌洗液样本，分别进行常规离心涂片细胞学诊断和琼脂一 石蜡双包埋切片免疫细胞化学染色，并结合临床资料综合分析。结果 123例样本中， 细胞学诊断阳性39例，阴性64例，诊断可疑者20例，对所有样本结合免疫细胞化学 染色和临床随访确定最终诊断。经以上校正后，细胞学涂片诊断的符合率为83．74％，但 存在16．26％的诊断灰区，将琼脂一石蜡双包埋切片进行免疫细胞化学标记，对于细胞学 可疑的支气管肺泡灌洗液样本，P53、CEA等作为首选的恶性肿瘤标志，而对于胸水样本 利用TTF-I、P53、CEA确定是否为肺癌所致的胸膜转移，如考虑其他转移癌的可能，根 据常见原发瘤来源和患者的病史、影像学检查等临床资料进一步确定特异性标志物，如 诊断敏感性和特异性将提高至100％。结论对离心涂片所余细胞沉淀做琼脂一石蜡双包 埋切片后，利用有针对性的抗体组合进行免疫细胞化学染色对于体液中异型细胞的良恶 性鉴别及恶性细胞的组织来源判定具有较高的参考价值，可以大大提高细胞学诊断的敏 感性和特异性。 肺癌的预后取决于早期筛查、早期诊断以及及时有效的治疗，胸腔穿刺、纤维支气 管镜等临床微创检查均可获得大量含脱落细胞的体液样本(胸水、支气管肺泡灌洗液 等)，其细胞病理学检测是肺癌诊断、分期和疗效监测的重要手段。但常规细胞学多采 ·100· 用直接离心后涂片镜检，诊断阳性率较低。 如何利用体液标本中有限的细胞成分，挖掘 更灵敏的标志物和更简便快捷的检测方法， 成为目前细胞病理学的研究热点之一。 材料与方法 1．材料： 收集北京市肿瘤医院和天津市胸科医院住院及门诊患者的胸水及支气管肺泡灌洗 液共123例，其中胸水100例，支气管灌洗液23例。胸水中25例来源于非肿瘤患者， 75例来源于肿瘤患者，其中肺肿瘤患者58例(鳞癌5例，腺癌52例，血管源性肿瘤l 例)，乳腺癌11例，肾癌4例，鼻咽癌和睾丸癌各1例；支气管灌洗液中8例来源于非 肿瘤患者，15例来自于肺癌患者(鳞癌12例，小细胞癌2例，腺癌1例)。 2．方法： 2．1琼脂一石蜡双包埋： 通过胸腔穿刺术或纤维支气管镜取得体液标本约50ml，其中lOml采用直接离心涂片 管底细胞沉淀。向分装后的细胞沉淀中加入10％中性福尔马林液后静置固定6d,时后， 3000rpm离心5分钟，用吸管将沉淀物置于玻片上，用定性滤纸吸去多余水份。将3％琼 脂加热冷却至未凝之时，用吸管吸出适量滴于细胞沉淀周围及其表面，自然凝固后用手 术刀修整成为规则的小块，经常规病理的脱水、透明、浸蜡过程后包埋成石蜡块，并使 u 用APES处理的载玻片制备连续的4m石蜡切片，常规HE染色。 2．2免疫细胞化学染色 免疫细胞化学染色所用抗体及相关试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，染色步 骤按即用型E1iVision 皮细胞抗原(Mesothelial 为高压修复2min。 ·10l· 2．3结果判定： 免疫细胞化学染色切片以显微镜下根据DAB显色部位及强度判定染色结果，并使用 IDA2000病理图文分析系统采集图像。 结果 用琼脂一石蜡双包埋切片法制出的切片厚薄均匀，细胞结构完整，形态清晰，每个 高倍镜视野中的有效细胞数明显多于常规涂片法。支气管肺泡灌洗液样本的HE染色切 片中可见支气管黏膜上皮细胞、淋巴细胞及少量肺泡巨噬细胞，胸水样本的HE染色切 片中可见到间皮细胞、红细胞、淋巴细胞等炎细胞及渗出的纤维蛋白成分，部分间皮细 胞呈片状。恶性者可见异型细胞散在或成团分布，并可见恶性肿瘤细胞的组织学结构， 如腺团样或腺管样细胞排列方式。免疫细胞化学阳性信号定位准确，对比度好，背景干 净。 123例样本中，细胞学诊断阳性39例，双包埋切片中均可见到明确的肿瘤细胞，细 胞学诊断阴性64例，双包埋切片中未见肿瘤细胞或异型细胞，仅见有淋巴细胞和间皮 细胞。细胞学诊断可疑者20例，均来自肿瘤患者，双包埋切片中