体外筛选拮抗产气荚膜梭菌鸡源乳酸杆菌.pdfVIP

四川省畜牧兽医学会2010年学术年会 体外筛选拮抗产气荚膜梭茵的鸡源乳酸杆菌水 李洁萍1’3倪学勤L2曾东-t2刘丽达1’2魏豪1’2 (1．四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心； 2．动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川，雅安625014； 3．四川省遂宁市船山区畜牧食品局动物疾控中心 四川，遂宁629000) 摘 要 为了分离对产气荚膜梭茵具有拮抗作用的鸡源乳酸杆茵，在产气荚膜梭茵压力下，从健康 草科鸡嗉囔、空肠、回肠和盲肠内容物中分离到5株乳酸杆茵，通过耐酸、耐胆盐和耐热试验，筛选到2株 (S。和H：)耐受性较好的乳酸杆菌，再运用双层琼脂法检测这2株乳酸杆菌对产气荚膜梭菌的拮抗效果，发 现乳酸杆菌H：具有很好抑茵性能，其体外抑茵成分主要是酸性依赖物质。 关键词乳酸杆菌；产气荚膜梭菌；拮抗作用；鸡 乳酸杆菌是人和动物肠道正常菌群中的优势菌，具有调节肠道菌群平衡、抑制肠道致病菌定植、提高 机体免疫力、改善营养状况等作用。在畜牧业中，以乳酸杆菌为主的益生素产品日益增多，广泛用于促进 动物增重、提高饲料报酬和减少发病率。但目前益生素菌种大多直接分离自健康的人和动物，后期筛选 的工作量很大，很难从众多的菌株中快速得到具有特定抑菌作用的菌株。 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种广泛存在于自然环境中的人兽共患病原菌，可引起多种 动物坏死性肠炎、肠毒血症、人类食物中毒和创伤性气性坏疽，以及不同日龄鸡的坏死性肠炎。目前，我 国养鸡业中普遍通过在饲料中添加抗生素来控制产气荚膜梭菌感染，但是，随着抗生素残留和病原菌抗 药性问题的日益突出，以及开发绿色食品的需要，从其他方面寻找防治鸡坏死性肠炎的措施显得尤为重 要。本试验从健康草科鸡肠道采集内容物，在产气荚膜梭菌压力下直接分离具有拮抗作用的乳酸杆菌， 为探索微生态防治鸡坏死性肠炎提供试验菌株。 1材料和方法 1．1试验材料 1．1．1 实验动物草科鸡购自四川省石棉县田湾河野生资源开发有限公司。 1．1．2茵株产气荚膜梭菌CVCC52购自中国兽医药品监察所菌种保藏中心。 1．1．3培养基按参考文献配制：疱肉培养液、卡那霉素卵黄琼脂培养基(cW)、厌氧蛋白胨水、MRS培养 基、酪蛋白胨一亚硫酸盐一环丝氨酸琼脂培养基(，I’sC)。 、 人员科研启动基金资助项目 作者简介：李洁萍(1982一)．女．北京昌平人。硕士研究生，lijiepin91025@163．com 通讯作者：倪学勤，动物微生态方向．xueqinniCt啊ahoo．com 第三篇疾病防治 1．2试验方法 1．2．1鸡源乳酸杆菌的分离从鸡的嗉囔、空肠、回肠和盲肠中各取0．59内容物，分别加入10mL疱肉培 涂布MRS琼脂培养基，37。C厌氧培养24h，挑取培养基上疑似乳酸杆菌菌落涂片镜检，并进行纯培养。 1．2．2乳酸杆菌属的鉴定镜检确定是革兰氏阳性后，通过运动性试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试 验、吲哚(靛基质)试验、硫化氢试验和过氧化氢酶试验对纯培养物为杆状的细菌进行属的鉴定。结合《乳 酸细菌分类鉴定及实验方法》描述的常见属种的生境判定。 1．2．3耐酸性试验取乳酸杆菌培养液4mL，4000r／min离心30min，弃上清，将菌体用生理盐水洗涤3次， 加入4mL生理盐水稀释，用10 计数法测定活菌数，以pH6．0菌液为对照，计算细菌存活率。 X100％ 存活率=[19Nl／lgN01 N。一酸处理后的活菌数；No-pH6．0活菌数 1．2．4耐胆盐试验配制胆盐浓度分别为0．1％、0．3％、0．5％、0．6％的厌氧蛋白胨水，按l％比例接种乳酸 杆菌，37。C厌氧培养24h，测定培养液的OD鲫值，以不加胆盐的厌氧蛋白胨水为对照，计算胆盐耐受率。 1．2．5耐热性试验取乳酸杆菌培养液4mL，分别于370C、50。C水浴处理15min，测定活菌数，以37℃水 浴处理为对照，计算存活率。 100％ 存活率=[19N，／lgN。】X N。一50。C水浴处理后的活菌数；No一37。C水浴处理后的活菌数 30min，菌体用生理盐水洗