小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管平滑肌细胞实验研究.pdfVIP

中国中西医结合学会周围血管疾病委员第七届换届暨学术交流会 论文集 DNAmark相比较，条带位置相符(图3)。 2．6免疫组织化学染色：扩增的细胞免疫组织化学染色．第八因子抗体反应显示阳性(图8)。 3．讨论 在特殊的体外诱导培养条件下，ESCs可以定向分化为某种特殊类型的细胞或组织。关于ESCs的 定向分化，目前主要足从培养方式的改进、分化诱导因子的选择和针对不同的终末靶细胞等方面着手研 究。在胚胎发育中，先由未分化的胚胎干细胞分化成为血管细胞，再形成内皮细胞，彼此组成管道状结 道结构，这称为血管新生或芽殖(angiogenesis)。目前已经发现细胞基质对调节内皮细胞的迁移、增殖 l(TGF．I 和管道形成过程起着重要作用，其中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和转化生长因子一B 13 l是1978年由Delaro等首先从小鼠肉瘤病毒转化的正常大鼠肾成纤维细胞的培养液中发现的，分布广 泛，在多种组织器官中发挥作用，是一种具有双相调节功能的生长因子，是细胞增生、分化、细胞外基 质和免疫应答的有效调节者VEGF能特异性的促进血管内皮分裂、增殖及迁移，被公认在血管生成中 作为一个中心调节者，是最有力的血管生成因子。然而，越来越多的证据表明，一种特异性细胞因子所 激发的细胞反应不是孤立的，TGF-B l对VEGF起诱导作用，促进血管生成[121。本实验研究中，分别 应用了不同浓度的TGF-B l和VEGF进行单独及混合诱导，结果发现3ng的TGF．Bl和50ng的VEGF 诱导效果最好，并证实了两者合用进行诱导的拟胚体周边出现的卵石样细胞数最多，状态最好，更易形 成管样结构，且经换液处理，细胞活力可维持3周以上。经相差显微镜观察证实，ES细胞形成的EB 分化出来的管道是由卵石样细胞构成的，经RT--PCR检测，这些细胞具有Ⅷ因子和CD34基因的表达： 经免疫组织化学检测，细胞显示Ⅷ因子免疫阳性染色。Ⅷ园子主要由内皮细胞合成，因此Ⅷ因子被作为 鉴定内皮细胞的特异性标记。CD34内皮细胞抗原在毛细血管和小血管内此细胞呈稳定强阳性，被认为 是目前血管内皮细胞最可靠标记。“种子细胞”是组织工程研究的三大方向之一，种子细胞来源困难一 直是影响组织工程发展的关键问题。本实验为组织工程化构建血管提供了内皮细胞来源的新途径，但是 ESCs的定向诱导分化是一个复杂的问题，很难达到纯净单一的分化细胞。我们还要面临很多问题，如： 有效的诱导分化途径、分化细胞的纯化、大量扩增等问题，这些问题的解决将为“种子细胞’，带来真正的 转机。 小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管平滑肌细胞的实验研究 熊吉信1刘兆轩2刘小春2杨春江1 据统计全世界每年大约要施行850，000多例血管重建手术，大多数都使用自体血管及人工血管作为 stem cell，ESC)是来自囊胚内细 替代品。自体血管有许多优点，但来源有限。胚胎干细胞(embryonic 胞团的多潜能干细胞，具有发育全能性和在体外可被诱导分化为各种类型细胞的特性。目前对ESC的 研究在国内外已经成为热点，但对胚胎千细胞的定向诱导机制并不明确，通过选择适当的诱导剂可以使 胚胎干细胞向某种类型细胞分化的趋势增加(1)。 1．材料和方法 实验动物及细胞系怀孕12．5d的昆明小自鼠(由南昌大学医学院动物中心提供)，小鼠胚胎干细 Culture 胞系129X／SvJ，购于美国模式培养收集中心(AmericanType Collection，ATCC)编号分别为 SCRC一1018。 1．2主要试剂及仪器DMEM高糖(Gibco)：胎牛血清(Fetalbovine serum，FBS；Oibco)；新生牛 amino 血清(四季青)；L-谷氨酰胺；非必