PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片构建的研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 PRRS—CSF—PCV2诊断DNA芯片构建研究 肖驰曹三杰文心田张焕客 (四川农业大学动物科技学院基因芯片实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室 雅安625014) 强度1000(信号中位值模式量化)。该芯片具有特异性高、灵敏度高和可重复利用的优点。应用 5 15％。 关键词猪生殖呼吸道疾病综合症病毒猪瘟病毒猪圆环病毒2犁DNA芯片 前言 ． 猪瘟、猪繁殖与呼吸道综合征和猪圆环病毒2型感染是养猪生产中常见的二大病毒性传染病，广泛分 布于世界上养猪国家和地区，在我国尤为突出【1’18】。它们常与细菌如猪附红细胞体、链球菌、副猪嗜血杆 菌、猪肺炎霉形体等混合感染，造成猪只大量死亡，制约养猪生产发展【19．2引。为了控制疾病，生产需要能 同时检测多种疾病的诊断技术，基因芯片技术就成为人们研究的热点。 检测PRRS、CSF和PCV2感染，现将研究报道如下。 1材料 1．1靶标重组质粒 PRRS美洲型：T／PRRS．PS9(基因收录号：AY775134)，5’UTR片段；州11(基因收录号； AY775133)，ORF6基冈片段； PRRS欧洲型：T／E6，ORF6基冈片段；T／E8，5’UTR片段；； 基因片段；T／HCLVP7(基因收录号：AY775141)，E2基囚片段： PCV2：T／PCVCQB7，Cap基因片段；T／PCVT3，Rep基因片段，本研究构建和保存： 1．2毒株 PRRSV C14．2，分自重庆某发生繁殖障碍和严重呼吸道疾病的猪群； AMERVAC．PRRS，LaboratoriosHIPRA，S．A．，批号8JR5．1： PRRSV．SCU株，四川农业大学动物生物技术中心颜其贵副教授惠赠： PRRSV弱毒疫苗株，中牧·成都惠赠； ． 猪瘟病毒：脾毒，来自重庆某猪场具有典型猪瘟症状的病例，．70℃超低温冻箱保存； 猪瘟兔化弱毒，本实验室保存； 猪圆环病毒病肺组织样：PCVCQB7，P6，来自重庆某猪场：MS，来自四川眉山某猪场。本实验室 保存； 临床病料：采自重庆、四川等地猪场发病仔猪肺组织、肠系膜淋巴结等，．20℃保存。 1．3材料和主要试剂 DNA芯片基片：BaiO⑩氨基载玻片，上海百傲科技有限公司； TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Vet．3．0，TaKaRa TaKaRa Kit，TaKaRa Co．Ltd．，-20℃保存： PCRAmplificationBiotechnology(Dalian) Biosciences。 CY3．dCTP：25nmol，PA53021，批号为300989，Amersham 279 猪传染病 DNA PurificationKitVer．2．O：TaKaRa Fragment Biotechnology(Dalian)Co．Ltd．： 1．4主要设备 MicroarrayPrintingSystem，SpotArrayTM24，PackardBioscience，USA： MicroarrayScanning Bioscience，USA； System，ScanArray⑧4000，Packard 梯度PCR仪，Px2，Thermo hybaid，美国产； ‘ 2方法 2．1靶标和定位基因制备 以靶标重组质粒DNA为模板，采用PCR法扩增