基础研究细菌内毒素体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮.pdfVIP

·1646 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2012;32(11) 基础研究 细菌内毒素体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮实验模型 的条件优化 黄 利，夏 鸿，伦玉宁，余传林，张 群，陈娜娜，雷林生 南方医科大学药学院，广东 广州510515 摘要：目的优化细菌内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO 实验模型的条件。方法 采用Hanks 液灌洗小鼠腹腔，收集腹腔留 居巨噬细胞，利用铜绿假单胞菌脂多糖（LPS）作为内毒素刺激巨噬细胞产生NO ，以Griess 法检测培养上清液中NO 的浓度，考 察细胞浓度、LPS 浓度、LPS 刺激时长、培养液体积等因素对巨噬细胞产生NO 的影响，优化实验条件，并用已知药物验证模型的 6个细胞/ml ，96孔板中每孔100 μl ；LPS 可靠性。结果 本实验条件下，细胞浓度对NO 的产生具有关键性影响，最适浓度为6×10 浓度 1 μg/ml 时，NO 的产生随LPS 浓度的增加而增加（P0.001 ），LPS 浓度 1 μg/ml 时，NO 的增加的幅度明显下降，当LPS 浓度为10 μg/ml 时，NO 产生达到峰值；NO 的产生随LPS 刺激时间的延长，其含量相应增加，24 与48 h 之间的增加幅度大于 48 h 与72 h 之间的增加幅度（P0.05 ）；培养上清中NO 的含量与培养液的体积有一定关系，100 μl 时的NO 含量最高。阿司 匹林(1 mmol/L)、地塞米松(10 μmol/L)、环孢霉素A( 10 μmol/L)均能明显抑制LPS 刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO （P0.001）。 结论 巨噬细胞浓度、LPS 浓度、LPS 刺激时长是建立内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮实验模型的主要影响因素。推 6个细胞/ml ，100 μl/孔；LPS 浓度10 μg/ml ；LPS 刺激时长24 h 或48 h ；培养液体积100~200 μl。 荐方案为：巨噬细胞浓度5×10 关键词：巨噬细胞；内毒素；脂多糖；一氧化氮；实验模型 中图分类号：R967 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）11-1646-05 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.11.028 Optimization of a lipopolysaccharide-stimulated nitric oxide production model in mouse peritoneal macrophages HUANG Li, XIA Hong, LUN Yuning, YU Chuanlin, ZHANG Qun, CHEN Nana, LEI Linsheng School of Pharmaceutical Sciences, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To optimize the experimental model of nitric oxide (NO) production in mouse peritoneal macrophages in response to lipopolysaccharides (LPS) stimulation. Methods Mouse resident peritoneal macrophages were collected by lavaging the peritoneal cavity of mice with Hanks solution and stimulated with Pseudomonas aeruginosa LPS for NO production. NO concentration in the culture supernatants was measured with Griess Reagent. Th