RNA干扰抑制c-myc基因对体外培养大鼠血管平滑肌细胞活性的影响.pdfVIP

医学研究生学报2012年 1月 第25卷 第 1期 JMedPostgra，Vo1．25，No．1，January，2012 · 11 · 论 著 (基础研究) RNA干扰抑制 c—myc基因对体外培养大鼠血管平滑肌 细胞活性的影响 吴海卫，沈中华，王 军，景 华，李德闽 [摘要】 目的 血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)增殖是导致移植静脉再狭窄的主要原因之一，早期 应答基因c—myc是促进平滑肌细胞持续增殖的关键基因。探讨针对 c—myc基因的RNA干扰对体外培养平滑肌细胞增殖和活性 的影响。 方法 体外培养大鼠VSMCs，构建3对针对c．myc基因的RNA干扰序列(siRNA．1#、siRNA-2#、siRNA-3#)和1组阴性 对照序列，以Lipo2000为载体转染体外培养细胞，Q—RT-PCR检测c—mycmRNA表达，Westernblot检测转染c．myc蛋白表达 ，MTr 法检测细胞增殖状态和活性。 结果 转染3对 siRNA序列48h后 ，各组c．mycmRNA表达水平显著低于阴性对照组和正常细 胞组 ，3组转染组之间c—mycmRNA表达无显著差异。转染siRNA一1#、siRNA-2#序列后，c—myc蛋白表达低于转染 siRNA．3#序列 组、阴性对照组和正常细胞组，而转染 siRNA一3样序列组 cm·yc蛋白表达与阴性对照组和正常细胞组相比无明显差异。转染24h 各组间细胞活性未见显著差异，48h时细胞活性与42h相比无显著增加，至72h时各组细胞活性有明显增加，以转染 siRNA．1}}序 列组增加量最少。阴性对照组和正常细胞组抑制效率基本保持为零水平。转染 siRNA．1#、siRNA．2#序列后 ，24、48、72h后抑制 效率逐渐增加，转染siRNA一3#序列后72h后其抑制效率开始降低，各相同时间点以转染siRNA一1#序列后抑制效率最高。 结论 体外转染c—myc基因siRNA序列，能显著降低平滑肌细胞c—myc基因mRNA和蛋白表达，抑制细胞活性和增殖。随着作用时间延 长，RNA干扰 (RNAinterference，RNAi)后细胞活性缓慢增加 ，而抑制效应持续显著增加 ，以siRNA—l#F]~Jl抑制作用最为明显。 【关键词】 c-myc；血管平滑肌细胞；RNA干扰 [中图分类号】 Q528．2 [文献标志码】 A [文章编号】 1008—8199(2012)O1-0011-06 RNAinterferingtoc．mycincreasestheactivityofculturedratvascularsmoohtmuscleceHs／nv／tro wu Hai—wei，SHENZhong—hua，WANGJun ，JING Hua，LIDe—min (1．DepartmentofCardiothoracicSurgery，SchoolofMedicine，NanjingUniversity／NanfingGeneralHospitalof NanjingMilitaryCommand，P ，Nanfing210002，Jiangsu，China；2．DepartmentofCardiovascularSurgery，The SecondHospitalAffiliatedtoZhejiangUniversity，Hangzhou310009，Zhejiang，China) [Abstract] objeetive Theproliferationofvascularsmoothmusclecells(VSMCs)isoneofthemaincausesofveingraft restenosis．Ithasbeen identified cmy—c，an immediate—earlyresponse gene，playsa key role in the continuousproliferation of VSMCs．Thepresentstudyaims