TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.pdfVIP

· 108 · 2012年 2月第32卷第 2期 ChinJMicrobiolImmuno1．February2012，Vo1．32。No．2 ． 基 础 免 疫 学 ． TLR4基因沉默下调 TLR2信号通路在 RAW264．7 细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用 饶振华 朱根华 谢卫华 苏明声 龙凯 罗闳丹 谢小梅 【摘要 】 目的 研究单核巨噬细胞 RAW26,~．7受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路 发挥的作用 ，以及沉默TLR4基因后 ，对 TLR2信号通路的影响。方法 利用 RNAi技术将 11LR4一 siRNA转染RAW264．7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激 12h，将细胞随机分为正常组(N组)、正常+ 烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4．siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢 子刺激组[TLR4(RNAi)+ 组]，RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、 TLR4、MyD88mRNA及TNF．0【蛋 白的表达变化。结果 (1)TLR4基因沉默前：与N组比较，N+ 组 TLR2、，I’IJR4、MyD88mRNA及 TNF．0【蛋 白表达量均显著升高 (P0．05)。(2)TLR4-siRNA(100 nmol／L)转染RAW264．7细胞，沉默效率达83％。(3)TLR4基因沉默后：与N组比较，TLR4(RNAi) 组TLR2、MyD88mRNA的表达量均显著降低 (P0．05)；与 N+ 组 比较，TLR4(RNAi)+4厂组的 TLR2、MyD88mRNA和TNF—ot蛋白的表达量均显著降低 (P0．05)；与TLR4(RNAi)组 比较，TLR4 (RNAi)+A厂组MyD88mRNA表达量显著升高(P0．05)，而TLR2mRNA及TNF·蛋白表达量却无 显著变化(P0．05)。结论 RAW264．7细胞受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和 11LR4信号通路被激活， 通过释放促炎细胞因子TNF一0L发挥抗烟曲霉孢子刺激作用 ；当沉默TLR4基因后 ，TLR2信号通路不 能被很好地激活来抵抗烟 曲霉孢子对细胞的刺激作用，沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在 RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用，可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重 要的作用。 【关键词 】 TLR2；TLR4；TLR4一siRNA；烟曲霉孢子；调控机制 SilencinggeneofTLR4down-regulatestheeffectofTLR2 signaltransducfioninRAⅥr264．7cellsto anti-Aspergillusfumigatusconidiastimulation 础0 Zhen—hua ，ZHUGen—hua，X1E —hua，SU Ming—sheng，LoNGKai，lJUoHong—dan。XlEXiao—mei． ‘KeyLaboratoryofModernPreparationsofTradi— tionalChineseMedicine，Min~tryofEducation，JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedwine，Nanehang 33Ooo4．China Correspondingauthor：XIEXiao—mei，Email：jxxm1964@sina．com 【Abstract】 objective TostudytheroleofTLR2andTLR4signaltransductioninRAW264．7 monocyte—macrophagesstimulatedbyAspergillusfumigatusconidia，andtoinvestigatetheexpressionofTLR2 signal transductionaftersilencinggeneofTLR4．Mehtods Macrophageswererandomlydividedintonormal group(Nrgoup)，normal+stimulatedwithAspergillusfumigatusconidia(N+ group)，nomral+transfected wi出TLR