TB16．3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 2013，29 (8) ChineseJournalofZoonoses 79l DOI：10．3969／c]zj．issn．1002—2694201308．012 TB16．3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究 朱中元 ，刘 元。，王海波 ，肖劲逐 ，邱一帆。，颜 磊。，陈 德。，刘爱 国。，杨 欣。 摘 要 ：目的 通过构建结核分枝杆菌蛋 白TB16．3的原核表达载体并表达纯化，对其检测抗体 的性能进行评价 。方法 用 PCR法从结核菌 H37Rv基 因组 DNA扩增 TB16．3基 因，连接到表达载体 PET一30a上 ，在大肠杆菌 中表达 ；组氖酸标签 镍柱层析纯化重组蛋 白。结果 建立 EIISA 方法检测 116份 TB患者和 96份健康对照者血清 中的抗结核菌TB16．3抗体 。 构建 了表达 TB16．3的大肠杆菌工程菌，发现 目的蛋 白主要 以可溶形式存在。诱导剂 IPTG浓度为 1mmol／I，37℃培养 5h 可获得最大量表达 。而在 28℃时重组蛋 白为可溶形式表达 。用重组 TB16．3蛋 白，EIISA方法检测 ¨8份 TB患者和 96份 健康者血清 ，敏感性、特异性和调整一致率分别为 72．9 、86．5 和79．6 。抗 TB15．3抗体的敏感性、特异性和调整一致率 分别为46．6 、99．0 和 76．0 。抗CFP一10的敏感性 、特异性和调整一致率分别为75．4 、55．2 和 65．7 。结核病 患者 抗 Rv2626C抗体 阳性率(44．1 )显著低于其在正常对照的阳性率(75．0 ，Y。一20．8，P0．01)。TB15．3和 TB16．3等量包 被检测 ，敏感性、特异性和一致率分别达 69．4 、96．9 和 83．7 ，检测非 TB肺部疾病患者 ，其抗体 阳性率仅为 9．6 ，特异 性为9O．4 。TB15．3和 TB16．3混合后 同时包被检测 ，结合 TB15．3单独检测的结果 ，则敏感性、特异性和一致率分别达 82． 2 、95．9 和88．9 ，一致率为最高。结论 目的基 因克隆入宿主菌 中并表达成功 ，获得制备上述4种蛋 白的最适条件。获 得 的重组 TB16．3、CFP一10和 TB15．3蛋 白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合 。Rv2626C抗体可能被用于结核 患者恢 复期 的评估 。 关键词 ：结核分枝杆菌；TB16．3蛋 白；表达 ；血清学诊断 中图分类号 ：R378 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2694(2O13)08—0791—06 ExpressionanddiagnosisevaluationofproteinTB16．3 inM ycobacterium tuberculosisinfection ZHU Zhong—yuan 。LIU Yuan ，WANG Hai—bo ，X1AO Jin—zhu ， QIU Yi—fan ，YAN Lei。，CHEN De。，LIU Ai—guo。，YANG Xin。 (1．HainanProvincialNongkenGeneralHospital，Haikou570311，China； 2．TheCollegeoJEnvironmentandPlantProtection，HainanUniversity，Haikou570228， 3．NanjingPotomacBiotechnologyCo．，Ltd．，Nanjing200800，China) ABSTRACT ：InordertoevaluatethepotentialofTB16．3proteininserodiagnosisofTB，Rv2815Cgenewasclonedandthe proteinwasexpressedinEscherichiacoli．ThegeneencodingTB16．3proteinwasamplifiedbyPCR from genomeofM ．tub