新生鼠缺氧缺血性脑损伤时三磷酸肌醇激酶信号通路与缺氧诱导因子1α 的调适.pdfVIP

1102 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, September 2008, Vol. 22, No.9 · · 新生鼠缺氧缺血性脑损伤时三磷酸肌醇激酶信号通路 1α 与缺氧诱导因子 的调节 # 李丽华 屈艺 毛萌 母得志 【摘  要】 目的 探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子 1α （hypoxia inducible factor 1α ，HIF-1α ）蛋白 的表达及三磷酸肌醇激酶（phosphoinositid 3-kinase/Akt ，PI3K/Akt ）信号通路的激活，推测PI3K/Akt 信号通路与神经元 HIF-1α 表达调节的关系，以期更确切地阐明PI3K/Akt 在发育期脑缺氧缺血性损伤（hypoxia ischemia brain damage ，HIBD ） 神经元HIF-1α 表达中的作用。  方法 10 d 龄SD 大鼠56 只，分为正常对照组（n=12 ）、假手术组（n=12 ）、实验组（n=24 ）、 wortmannin 干预组（n=4 ）和溶剂干预组（n=4 ）。实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎，氮氧混合气（92% N 、8% O ） 2 2 缺氧2.5 h ，即为HIBD 模型；假手术组不结扎颈总动脉，不作缺氧处理；正常对照组不作任何处理。wortmannin 干预组和 溶剂干预组分别在侧脑室内注射wortmannin 和DMSO 、PBS 3 μL ，30 min 后制备HIBD 模型。分别于建模后4 、8 及24 h 处死动物取脑组织，应用免疫组织化学法检测HIF-1α 、Akt 蛋白的分布和表达，Western blot 检测HIF-1α 、Akt 及p-Akt 蛋 白含量。  结  果 实验组HIF-1α 蛋白表达在术后4 h 明显升高，8 h 达高峰，24 h 后下降；p-Akt 蛋白于术后4 h 明显升高， 8 h 后下降。正常对照组各时间点HIF-1α 和p-Akt 均有极少量弱阳性表达。实验组各时间点HIF-1α 蛋白表达明显高于 正常对照组，差异有统计学意义（P 0.01 ） ；实验组p-Akt 于4 h 和8 h 明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P 0.05 ）。 Akt 蛋白表达随术后时间的延长无明显变化，与正常对照组比较差异无统计学意义（P 0.05 ）。术后4 h wortmannin 干预 组的HIF-1α 蛋白的表达明显下降，与溶剂干预组及实验组比较差异有统计学意义（P 0.01 ）。  结论 发育期HIBD 时， 可激活PI3K/Akt 信号通路，并诱导HIF-1α 表达增加，可针对PI3K/Akt 信号通路和HIF-1α 寻找新生儿HIBD 新的治疗靶点。 【关键词】 脑    缺氧缺血 三磷酸肌醇激酶 缺氧诱导因子 1α 新生大鼠 中图分类号： R74 R722 文献标志码：A PHOSPHOINOSITID 3-KINASE/Akt PATHWAY INVOLVED IN REGULATION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1α IN HYPOXIA ISCHEMIA BRAIN DAMAGE OF NEONATAL RATS/ LI Lihua, QU Yi, MAO Meng, MU Dezhi. Department of Pediatrics, We