猪圆环病毒2 型细胞培育适应毒株的培育和鉴定.pdfVIP

维普资讯 第28卷 第3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．28．No．3 2006 年 5 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine May 2006 猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定 刘长明，张超范，危艳武，谭 斌，陆月华，谷守林 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要：从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征 (PMWS)淋巴组织病料 ，经聚合酶链式反应 (PCR) 证实为猪圆环病毒2型 (PCV2)感染，采用无污染的猪肾细胞系 (PK15)分离培养，并连续传代培育成一株 细胞培养适应毒 ，命名为PCV2／LG株 。分离毒株经细胞培养，于第25代后毒价显著升高，于第35代毒价可达 106TCID~m／L。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法 (IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴 定表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中；病毒感染的阳性细胞呈散在分布，阳性细 胞数可达5O％以上；免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团，病 毒粒子直径约为17nm；病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成，与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达 96．2％以上。用2mL的病毒细胞培养物 (1O叮CID L)接种3O日龄PCV2抗体 阴性仔猪3头，可引起典型 PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。 关键词：猪圆环病毒2型；病毒分离鉴定；毒株培育 中图分类号：$852．65+92 文献标识码 ：B 文章编号：1008-0589(2006)03-0248-05 Cultivationandidentificationofporcinecircovirustype2(PCV2)cell culture—adaptedstrain LIU Chang-ming，ZHANG Chao-fan，WEIYan—WU，TAN Bin，LU Yuehua，GU Shou-lin (NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinary ResearchInstitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，Ctfina) Abstract：A porcni’ecircovirustype2 (PCV2)wasisolatedfrom apigletlymphnodematerialwithpostweaning multsystemicwastingsyndrome(PMWS)usingPCV1·rfeepigkidneycellline(PK15)．Theisolatewascultivatedbyaseriesof passagesinthecells，andacellculture-adaptedstrainwasobtained，whichwastermedasPCV2／LG．ThevirustiterofPCV2／LG increasedmarkedlyafterthe25thpassage，andharvested10 TCID5om／Latthe35thpassage．Thevirusantigendistributedmai· nlyintheinfectedcellnucleolusand cytoplasm，theantigenpositivecellsshowed spotdistributionandaccountedformorethan 50％ byimmunopero