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第1页，共12页，星期日，2025年，2月5日一、实验目的与要求:1、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性2、学习并掌握革兰氏染色法第2页，共12页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理：革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。第3页，共12页，星期日，2025年，2月5日G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。第4页，共12页，星期日，2025年，2月5日三、实验仪器及材料1.仪器：显微镜、酒精灯等2.实验材料：菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌染色剂：草酸铵结晶紫染液、碘液、番红、95%乙醇第5页，共12页，星期日，2025年，2月5日四、内容与方法1.涂片2.晾干3.固定4.结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟；5.水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。第6页，共12页，星期日，2025年，2月5日6.媒染：碘液，媒染1min；7.水洗：用水洗去碘液。8.脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色10s-18s至流出液无色，立即水洗。9.复染：滴加番红复染1min；10.水洗：用水洗去涂片上的番红染色液。11.晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。12.镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。第7页，共12页，星期日，2025年，2月5日第8页，共12页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色流程图涂片干燥结晶紫染色碘液媒染水洗95%酒精脱色水洗番红染色水洗晾干镜检1分钟10秒1分钟固定水洗1分钟第9页，共12页，星期日，2025年，2月5日
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