第14章第39讲生物技术在其他方面的应用.pptVIP

第14章第39讲生物技术在其他方面的应用第1页，共34页，星期日，2025年，2月5日生物技术实践第十四章第讲生物技术在其他方面的应用39第2页，共34页，星期日，2025年，2月5日一、植物组织培养1.原理：植物细胞的全能性2.基本过程：第3页，共34页，星期日，2025年，2月5日(1)脱分化和再分化的比较起点关键因素条件脱分化外植体植物激素一般暗培养再分化愈伤组织细胞分裂素和生长素比例必须要光照(2)愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形的薄壁细胞。第4页，共34页，星期日，2025年，2月5日3.影响因素(1)外植体的选择：材料本身的种类、年龄、保存时间长短等。无机营养大量元素：如N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：如Cu、Mn、B、Fe、Zn(2)营养有机营养：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以及蔗糖等第5页，共34页，星期日，2025年，2月5日(3)植物激素①常用激素：生长素和细胞分裂素。②使用激素顺序不同对试验结果的影响：使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂又分化同时使用分化频率提高第6页，共34页，星期日，2025年，2月5日③生长素用量比细胞分裂素用量，其比值不同，对细胞发育的方向影响不同：比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形成比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形成比值适中：促进愈伤组织的形成(4)温度：一般将温度控制在18~22℃(5)pH：一般将pH控制在5.8左右(6)光照：每日用日光灯照射12h第7页，共34页，星期日，2025年，2月5日4.实验操作步骤(1)制备MS固体培养基：配制各种母液→配制培养基→灭菌(2)外植体消毒：酒精溶液消毒→无菌水清洗→次氯酸钠(或氯化汞)溶液→无菌水清洗(3)接种(4)培养(5)移栽(6)栽培第8页，共34页，星期日，2025年，2月5日5.月季的花药培养(1)被子植物的花粉发育小孢子母细胞→4个小孢子→1个小孢子(单核居中期)→1个小孢子(单核靠边期)→花粉粒(含一个花粉管细胞核和一个生殖细胞核)(2)产生花粉植株的两种途径第9页，共34页，星期日，2025年，2月5日(3)影响花药培养的因素①不同植物的诱导成功率很不相同；②同种植物的生理状况；③花粉发育时期；④亲本植株的生长条件、材料和低温预处理以及接种密度等。第10页，共34页，星期日，2025年，2月5日6.花粉植株的产生和植物茎的组织培养的比较菊花茎的组织培养月季的花药培养理论依据植物细胞的全能性基本过程脱分化、再分化影响因素选材、营养、激素、pH、温度、光照等操作流程制备固体培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培选材→材料消毒→接种和培养→筛选和诱导→移栽→栽培选育二、蛋白质的提取和分离第11页，共34页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质的提取和分离1.蛋白质的理化性质(1)具有两性(2)可以发生水解反应(3)可溶性、具有胶体的性质(4)盐析(5)蛋白质的变性(6)颜色反应第12页，共34页，星期日，2025年，2月5日2.操作步骤蛋白质的提取和分离一般为四步：①样品处理→②粗分离→③纯化→④纯度鉴定(1)样品处理第13页，共34页，星期日，2025年，2月5日(1)红细胞的洗涤①采集血样→②低速短时间离心→③吸取血浆→④盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复④⑤步骤三次(2)血红蛋白的释放将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10min。第14页，共34页，星期日，2025年，2月5日(3)分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心10min后，试管中的溶液分为4层：第1层(最上层)：甲苯层(无色透明)第2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄层固体)第3层(中下层)：血红蛋白的水溶液层(红色透明液体)第4层(最下层)：杂质沉淀层(暗红色)第15页，共34页，星期日，2025年，2月5日(4)透析取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h，目的是除去样品中相对分子质量较小的杂质。(2)凝胶色谱分离①制作凝胶色谱柱②装填凝胶色谱柱③样品加入和洗脱第16页，共34页，星期日，2025年，2月5日(3)结果分析与评价①对于血液样品的处理，需要经过洗涤、释放、分离、透