蛋白质的共价结构 .pptVIP

（二）、末端氨基酸残基的鉴定、末端分析2CC末端AAα氨基醇水解肽链，鉴定α氨基醇②还原法硼氢化锂第62页，共108页，星期日，2025年，2月5日肽链外切酶:从多肽链C-端逐个水解根据不同反应时间释放出的AA种类和数量蛋白质C-末端残基顺序。四种羧肽酶：A,B,C和Y；A和B(胰脏)、C(柑桔叶)、Y(面包酵母)∽A:除Pro/Arg/Lys/外所有C-末端AA残基∽B:只水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键∽Y：可作用于任何一个C-末端残基的肽键③羧肽酶法（二）、末端氨基酸残基的鉴定、末端分析2C第63页，共108页，星期日，2025年，2月5日（三）、二硫键的断裂盐酸胍/尿素解离多肽链间的非共价力。应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。第64页，共108页，星期日，2025年，2月5日1、酸水解常用6M盐酸或4M硫酸优点：水解产物不消旋缺点：Trp被沸酸完全破坏含羟基Ser、Thr、Tyr部分分解Asn、Gln酰胺基被水解（四）、氨基酸组成的分析第65页，共108页，星期日，2025年，2月5日2、碱水解一般用5M氢氧化钠缺点：许多AA受到不同程度的破坏部分水解产物发生消旋化优点：Trp不受破坏（四）、氨基酸组成的分析第66页，共108页，星期日，2025年，2月5日1、酶解法:内切酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶外切酶：羧肽酶和氨肽酶多肽链的选择性降解（五）、多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化目前序列分析方法最长只能几十个残基，因此需要裂解多肽，然后分离纯化。第67页，共108页，星期日，2025年，2月5日R1=Lys（K）或Arg（R）专一性较强，水解速度快R2=Pro（抑制）肽链水解位点胰蛋白酶trypsin减少断裂点：保护Lys侧链ε-NH2或修饰Arg胍基增加断裂点：将Cys变为类似Lys的结构第68页，共108页，星期日，2025年，2月5日R1=Phe（F）、Trp（W）Tyr（Y）等疏水性AALeu、Met和His稍慢R2=Pro（抑制）pH8-9肽链水解位点糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）水解速度与相邻AA性质有关:酸性：-/碱性：+第69页，共108页，星期日，2025年，2月5日R2=Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）、Ile（I）、Met（M）、Val（V）及其它疏水性强的AA水解速度较快肽链水解位点R2=Pro或Gly，不水解R1或R3=Pro，抑制水解嗜热菌蛋白酶（thermolysin)第70页，共108页，星期日，2025年，2月5日R1和/或R2＝Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）及其它疏水性AA水解速度较快R1=Pro（抑制）pH2肽链水解位点胃蛋白酶Pepsin第71页，共108页，星期日，2025年，2月5日肽链水解位点羧肽酶和氨肽酶第72页，共108页，星期日，2025年，2月5日2、化学裂解法①溴化氰水解法(Cyanogenbromide)——选择性地切割由Met羧基形成的肽键。（五）、多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化多肽链的选择性降解第73页，共108页，星期日，2025年，2月5日②NH2OH断裂：较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分断裂第74页，共108页，星期日，2025年，2月5日3、肽段的分离纯化：凝胶过滤、凝胶电泳和HPLC法第75页，共108页，星期日，2025年，2月5日N-端分析法

特点：能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。

1、Edman法（六）、肽段氨基酸序列的测定（苯异硫氰酸酯法）Edman于1950年首先提出。第76页，共108页，星期日，2025年，2月5日多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序含游离?-氨基的一端：氨基端或N-端含游离?-羧基的一端：羧基端或C-端AA顺序是从N-端开始以C-端氨基酸残基为终点如上述五肽：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln反过来写的是一个不同的肽第30页，共108页，星期日，2025年，2月5日肽键是aa间的基本