普通仪和荧光定量仪的使用.ppt

第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartI中心PCR(polymerasechainreaction)仪简介PartIIPCR原理PartIII普通PCR仪操作规程PartⅣ荧光定量PCR原理PartⅤ荧光定量PCR仪操作规程第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartI中心PCR仪简介荧光定量PCR仪Rotorgene3000普通PCR仪GeneAMPSystem9700第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartIIPCR原理AAAA蛋白/酶DNAmRNA蛋白中心法则基因表达转录水平翻译水平基因水平（Realtime）RT-PCRWesternblotPCR核酸的功能是储存和转移遗传信息，指导和控制蛋白质的合成；而蛋白质的主要功能是进行新陈代谢活动和作为细胞结构的组成成分。第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日PCR概念利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP（三磷酸脱氧核苷酸），对模板DNA反复多次地进行复制，从而得到大量扩增产物的反应过程，称为PCR。PartIIPCR原理第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartIIPCR原理PCR反应五要素引物（primer）酶（TaqDNApolymerase）dNTP（dATP,dGTP,dCTP,dTTP）Mg2+（magnesium）模板（template）第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartIIPCR原理PCR扩增的基本反应步骤1、变性：加热至95oC左右，使模板DNA变性。2、退火：降低温度至适合的温度（55oC左右，引物与模板DNA的互补序列配对结合。3、延伸：温度在70oC左右时，TaqDNA聚合酶从引物3端催化复制链以5-3方向延伸。第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1-3步25-30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍PartIIPCR原理第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartIIPCR原理PCR原理PCR的理论方程：Y=x×(1+Ev)nY：扩增物数量；X：起始模板数量；Ev：扩增效率；n：扩增循环数第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日PartIII普通PCR仪操作规程开机操作：打开PCR仪电源开关；向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。注意：9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程GeneAmpPCRSystem9700Version3.05User:***RunCreatEditUtilUserF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程SelectUserNameprecqllyf……AcceptNewEditDeleteCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程UserName___UseENTERkeytoselectacharacter.AcceptBackspCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopabcdefghijklmnopqrstuvwxyz第13页，共36页，星期日，2025年，2月5日PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程MethodsizelastusedExp000qin09