沉淀反应与凝集反应.pptVIP

免疫学及免疫学检验一、单相琼脂扩散试验(一)原理将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测的抗原物质在凝胶中自由扩散，与抗体结合形成沉淀环，沉淀环的大小与抗原浓度呈正相关。第30页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验(二)操作步骤1.将抗体和0.9%琼脂糖50~56℃混合，即刻倾注成平板。2.待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原溶液和不同浓度的抗原标准品溶液。3.置37℃，让其向四周自由扩散，24~48h后可见其孔周围出现沉淀环。第31页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验单向免疫扩散试验示意图第32页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验沉淀环的直径与待检标本内含量不是直线关系，有两种计算方法：(1)Mancini曲线：适用于大分子抗原，扩散时间48h，使用普通坐标纸作图，扩散环直径平方和浓度呈线性关系。(2)Fehcy曲线：适用于分子抗原，扩散时间较短，使用半对数坐标纸作图，抗原量的对数和扩散圈直径之间呈线性关系。第33页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验双免疫扩散试验（doubleimmunodiffusion）双向免疫扩散试验是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。第34页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验双向免疫扩散试验示意图第35页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验第三节免疫电泳技术免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。这种技术有两大优点，一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应，以此作更细微的分析。第36页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验免疫电泳包括:免疫电泳对流免疫电泳火箭电泳免疫印迹等第37页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验一）、免疫电泳免疫电泳为区带电泳与免疫双向扩散的结合。方法是先将样品加入琼脂中利用区带电泳技术将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多条弧形沉淀线。第38页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验第39页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验第40页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。第41页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验二）、对流免疫电泳对流免疫电泳实质上是定向加速度的免疫双扩散技术，其基本原理是：将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。第42页，共80页，星期日，2025年，2月5日免疫学及免疫学检验对流电泳示意