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诺丽酵素中环烯醚萜的测定

1范围

本标准规定了诺丽酵素中环烯醚萜含量的液相色谱测定方法。

本标准适用于诺丽酵素中环烯醚萜含量的测定。

本方法中环烯醚萜检出限为0.5mg/kg，定量限为2.0mg/kg。

2规范性引用文件

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文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

试样经离心分离得到上清液，经稀释定容后，用液相色谱紫外检测器分析，保留时间定性，外标法

定量。

4试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1乙腈，色谱纯。

4.1.2磷酸，色谱纯。

4.2标准品

4.2.1车叶草苷酸标准品：纯度≥98.0%。

4.2.2去乙酰车叶草苷酸标准品：纯度≥98.0%。

4.3标准溶液配制

4.3.1车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸混合标准溶液（2.5mg/ml）：分别准确称取25mg车叶草苷酸

和25mg去乙酰车叶草苷酸，用水溶解并定容至10ml。

5仪器

5.1高效液相色谱仪：配有紫外光检测器。

5.2离心机。

5.3分析天平：感量0.1mg。

5.4超声波溶解器。

1

5.5色谱柱：C18柱。

6分析步骤

6.1试样制备

6.1.1诺丽酵素汁

准确称取约20g（精确到0.001）试样，于离心机5000r/min离心5min，吸取上清液10mL于100mL

容量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，过0.22μm滤膜。

6.1.2诺丽酵素粉

准确称取约5g（精确到0.001）试样于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，于离心机5000r/min

离心5min，取上清液，过0.22μm滤膜。

6.2液相色谱参考条件

6.2.1色谱柱：C18色谱柱250mmx4.6mm,5μm。

6.2.2流动相：A:0.1%磷酸溶液；B:乙腈。

6.2.3检测波长：237nm。

6.2.4进样量：10μL。

6.2.5柱温：35℃。

6.2.6梯度洗脱表见表1。

表1梯度洗脱表

时间min流速mL/min0.1%磷酸溶液%乙腈%

00.5964

100.58515

220.5964

400.5964

6.3标准曲线的制作

分别准确吸取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸混合标

准溶液，用水定容至10mL，配制成质量浓度分别0.025mg/mL0.050mg/mL,0.10mg/mL,0.15mg/mL,0.20mg

/mL和0.25mg/mL混合标准系列工作溶液。将混合标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的

峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

6.4试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，测得峰面积，根据标准曲线得到试样中环烯醚萜的质量浓度。

7分析结果的表述

试样中环烯醚萜的含量（以车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸的总量计）按式（1）计算：

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