遗传学实验中果蝇三龄幼虫染色体制作技术的改进.docxVIP

遗传学实验中果蝇三龄幼虫染色体制作技术的改进 在遗传实验中，果苍蝇是最常用的实验材料之一。但果蝇三龄幼虫的染色体制片，按传统的方法，实验材料的选择培养及方法技术存在一些不足，学生难以把握，实验成功率较低。笔者就上述情况在以下几点做了一些改进，取得了良好的实验效果。 1 低温处理培养幼虫 选取强壮的残翅果蝇或黑檀体果蝇培养三龄幼虫，并进行低温处理，即25℃培养,待有大量幼虫出现后，再转入3～5℃的冰箱内冷处理24 h，再转入20℃温箱内培养，使幼虫充分发育。 2 关键操作 2.1 ．土壤中采用扫码拖取扫码 挑选发育完全，身体肥大的三龄幼虫，置于滴加有1滴生理盐水的载玻片上，分清幼虫的头和尾。左右手各执一根解剖针，左手的解剖针呈45°左右固定在幼虫身体前端的1/3处（即中肠处）;右手持解剖针压住幼虫的口器即黑色小点处，水平往前移动，唾液腺便随之被拖出来。学生只需在头部寻找，便可以找到唾液腺。这样就不易与肠、胃等内脏器官混淆在一起。如图所示。 在拖取唾液腺时强调必须将幼虫浸在滴有1滴生理盐水的载玻片上拖，否则，唾液腺即使被完整的拖出来，但由于缺少水分，唾液腺会因为干燥粘在玻片上而被破坏掉。此外，固定的位置必须是在靠近头部的1/3处，解剖针的角度只能在30°～45°左右，右手的解剖针必须水平向前移动。 2.2 制造低渗液 将清洗、等渗、低渗合并进行，即用0.8%的生理盐水清洗完幼虫后，将幼虫置于滴有1滴生理盐水的载玻片上解剖出唾液腺，丢弃杂质，直接加入1～2滴蒸馏水，使成为低渗液，处理8～10 min。 2.3 杂质剥离 在经过0.2 mol/L的HCL解离1～2 min后，只需要用解剖针轻轻拨动，脂肪等杂质便会和唾液腺自动分离。 3 分析 3.1 幼虫少、小 传统的方法是将果蝇在25℃条件下培养，生活周期短，幼虫少而且小，唾液腺不易剥离；经过低温处理和培养后，幼虫充分发育，不但虫体大，而且唾液腺也发达，容易解剖。 3.2 改善实验成功率 传统的取材方法在拖取唾液腺时，学生容易把唾液腺和其他组织混淆在一起，难以把唾液腺区分开来，实验成功率低。改进后，学生只需要在头部便可寻找到唾液腺，避免了和其他组织混淆。大部分学生在解剖了2～3只幼虫后便可熟练地找到唾液腺。改进的方法提高获取材料的成功率，加快了实验进程。 3.3 清洗、等渗、低渗组合 传统的方法是将清洗、等渗、低渗分开进行，学生把握不好很容易丢失材料，而且由于不断地滴加和吸去液体，低渗的效果亦不好。改进后将清洗、等渗、低渗几步合并在一起，过程简便，效果好。而且实验材料不易丢失，实验的成功率大大提高，且效果也提高了。 3.4 营养品质不高、染色体不清 在制备染色体装片时，如果脂肪等杂质剥离得干净，则制出的装片背景干净,染色体清晰突出;反之则背景不清晰,染色体模糊,影响观察。剥离杂质对初次接触的学生来说具有一定的难度，唾液腺细小，且外壁与脂肪等结合紧密，学生剥离时易丢失或弄坏。笔者经过实验发现在经过HCl解离后，只需用解剖针轻轻拨动，脂肪等杂质便与唾液腺自动分离了。