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大黄素等中药提取物对大肠杆菌的抑制作用 中国有丰富的中医资源。随着现代医学的发展，一些中医的抗菌作用得到了证实，但许多中药的有效性尚不明确。本研究通过检测大黄素等中药提取物对敏感性和耐药性大肠杆菌的抑制作用,探索能有效抑制大肠杆菌的中药成分。 1 材料和方法 1.1 菌株鉴定和保藏 敏感性和耐药性大肠杆菌由右江民族医学院微生物学与免疫学教研室分离、鉴定、保存,均经过AUTOREADER快速细菌自动鉴定仪鉴定。对照菌株CMCC44103由广东省微生物菌种保藏中心提供。耐药性大肠杆菌对亚胺培南(imipenem)、头孢哌酮(cefoperazoneo)、左氧氟沙星(levofloxacin)耐药,敏感性大肠杆菌则对亚胺培南、头孢哌酮(cefoperazoneo)、左氧氟沙星(levofloxacin)敏感。 1.2 中药提取物 1.3 培养基 1.4 年生动物厂和苏净集团2fd型超净工作台 SPX-150-Z型恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)、低温冰箱(日本SANYO公司)、SW-CJ-2FD型超净工作台(苏净集团安泰空气技术有限公司)。 1.5 实验方法 1.5.1 对倍稀释的药物浓度 把98%大黄素、97%黄连素、98%苦参碱、98%苦参素、90%黄芩苷与M-H琼脂液和肉汤液对倍稀释,药物最大浓度为256μg/m L,最小浓度为1μg/m L,备用。 1.5.2 细菌生长抑制率测定 采用标准琼脂平板、对倍稀释法检测MIC。将M-H肉汤过夜培养的大肠杆菌稀释至0.5麦氏单位(相当于1.0×108cfu/m L),用移液器接种约2μL菌液到已经制备好的含不同浓度药物的M-H琼脂平板上,每点约105cfu/m L,37℃孵育20 h后判断结果。以能完全抑制细菌生长的药物最低浓度为MIC。敏感性判断按照2012美国临床实验室标准化协会(CLIS)临床微生物检验标准。 2 结果 中药提取物对敏感性大肠杆菌的MIC测定结果见表1;对耐药性大肠杆菌的MIC测定结果见表2。 3 中草药抑菌效果 近年来,随着广谱抗生素的广泛应用,耐药细菌不断增多,特别是像大肠杆菌这些高度变异菌株,耐药性尤为突出。目前,医学界一直致力于寻找安全有效的抗菌药物。中草药是我国医学宝库中最珍贵的财富之一,它存在很多活性强、毒性低的有效成分,如从大黄中提取的大黄素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌、痢疾杆菌等均有抑制作用,能抑制细菌线粒体呼吸链电子传递、抑制呼吸与氨基酸、糖和蛋白质代谢中间产物的氧化和脱氢,导致细菌核酸和蛋白质合成受到干扰。现在比较多的中草药抑菌效果已经很明确,大黄、黄连、苦参、黄芩的体外抑菌效果也有报道,但是它们的提取物大黄素、黄连素、苦参碱、黄芩苷对细菌的抑制作用尚少见报道。 本实验结果证实大黄素、黄连素、苦参碱、黄芩苷对敏感性和耐药性大肠杆菌均有一定抑制作用,对敏感性大肠杆菌的MIC分别是32、64、64、128μg/m L;对耐药性大肠杆菌的MIC分别是32、64、128μg/m L,而黄芩苷无作用。大黄素和黄连素对敏感性和耐药性大肠杆菌的MIC无差异,而且效果明显,可以用来治疗耐药性大肠杆菌引起的疾病。苦参碱对耐药性大肠杆菌的MIC有升高,而黄芩苷对耐药性大肠杆菌无作用,说明苦参碱和黄芩苷治疗耐药性大肠杆菌引起的疾病并不理想。 98%大黄素、97%黄连素、98%苦参碱、90%黄芩苷购自陕西昂盛生物科技有限公司。 营养琼脂(Nutirent Agar)、M-H培养基(p H7.4±0.2)、营养肉汤(p H7.4±0.2)购自杭州天和生物有限公司。