SN_T 0176-2013出口食品中蜡样芽胞杆菌检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0176—2013代替SN0176---1992出口食品中蜡样芽胞杆菌检测方法Determination of Bacillus cereus in foods for export2013-09-16 实施2013-03-01 发布中华人民共和国D发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层奇真伪 SN/T 0176--2013前言本标准按照GB/T1.1-—2009给出的规则起草。本标准代替SN0176--1992《出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法》。本标准与S比，主要技术变化如下：发布单位改为“中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局”，标准名称改为出口食品中蜡样芽胞杆菌检测方法”；-增加前言；“主要内容与适用范围”改为“范围”，内容修改为“本标准规定了出口食品中蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于食品中蜡样芽胞杆菌的检验”；一增加检验流程图;结构上变化，将SN0176一1992中的两种方法分为~第一法”和第二法”；一增加了稀释液0.85%生理盐水”；-将取样量50g修改为“25g”；Za-增加计数公式 N=V×1ixa一—将培养温度30℃改为30℃±1℃;-将证实试验的培养温度由30℃改为36℃±1℃；-增加了API50CHB诊断试剂条和VITEK全自动微生物鉴定系统；“补充件”改为规范性附录”。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张泓、刘新亮、庞均予、李铁柱、高勇。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN 0176--1992。 SN/T 0176—2013出口食品中蜡样芽胞杆菌检测方法1 范围本标准规定了出口食品中蜡样芽胞杆菌的检测方法。本标准适用于食品中蜡样芽胞杆菌的检测。2设备和材料2.1烘干箱：180℃。2.2培养箱:30℃±1℃和36℃±1℃。2.3厌氧培养箱：36℃±1℃。2.4水浴锅:46℃±1℃。2.5pH计：25℃测量，精度±0.1pH单位。旋转混合器。2.62.7培养Ⅲ：直径90mm或100mm或者是140 mm。2.83吸量管:容量10.0mL和1.0mL,其0.5mL和0.1m刻度2.9显微镜。2. 10微量移液器：容量 10.0mL和.0mL,具QmI刻度2. 11均质器：拍击式或蠕动式。2.12高压蒸汽灭菌器。2. 13API 50 CHB 或 VITEK自动微生物鉴定系统3培养基和试剂3.1甘露醇卵黄多粘菌素琼脂(MP))：见附录AA.13.2胰蛋白陈大豆多粘菌素肉汤(TSRB):见A.2。3.3胰蛋白陈大豆羊血琼脂平板（TSSB)：见 A.3。3.4酚红葡萄糖肉汤：见A.4。3.5硝酸盐肉汤：见A.5。3.6　营养琼脂:见 A.6。3.7L-酪氨酸营养琼脂：见 A.7。3.8溶菌酶营养肉汤:见 A.8。3.9改良 V-P培养基:见 A.9。3.10动力培养基：见A.10。3. 11磷酸盐缓冲液：见A.11。1）API50CHB和VITEK全自动微生物鉴定系统由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 SN/T 0176—20133. 12碱性复红液：见A.13。3. 130.85%生理盐水：见A.14。3.14亚硝酸盐试剂：见A.15。3.15 V-P试剂:见 A.16。第一法‧蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序4蜡样芽胞杆菌平板计数法的检测程序见图1。25g（mL）样品+225mL稀释液，均质10 倍系列稀释每皿中加入15mL~20 mL MYP琼脂，取适当稀释倍数的0.1mL样品匀液，加入培养皿，涂布。30℃±1℃24 h选取3~5个典型菌落染色落血试验强白蒜素结晶试验葡萄糖发酵试验硝酸盐还原试验济菌游试验动力试验改良V:1「酯氨酸分解试验1P试验计算和报告图1蜡样芽胞杆菌平板计数法的检测程序2 SN/T 0176—20135 操作步骤5.1样品的稀释5.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或0.85%生理盐水的无菌均质杯中，以8000r/min～10000 r/min的转速均质1min～2min，或放人盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10样品匀液。5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置于盛有225ml磷酸盐缓冲液或0.85%生理盐水的无菌稀释瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中充分混匀，制成1：10样品匀液。5.1.3用1mL的无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，加到盛有9mL磷酸盐缓冲液或0.85%生理盐水的试管中，充分混匀，