SN 1085-2002副结核病补体结合试验操作规程.pdf

5中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1085--2002副结核病补体结合试验操作规程Procedure of complement fixation testfor paratuberculosis2002-09-01实施2002-0315 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN /T 1085--2002言前本标准是按照GB/T 1.11993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求编写的。本标准参考了国内外有关资料和我国在这方面的经验，制定了适合我国出人境动物检验检疫的操作方法。本标的附录 A、附录B为标准的附录。本标推由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口：本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准起草人：曹燮政、范华炜、王玉玲。本标准系首次发布的检验检疫行业标推。 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准副结核病补体结合试验操作规程SN/T 1085--2002Procedure of complement fixation testfor paratuberculosis1 范围本标准规定了副结核病补体结合试验的操作规范。本标准适用于牛、绵羊、山羊副结核病的检验，其他哺乳动物可以参照。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。GB/T6682一1992分析实验室用水规格和试验方法3器材和试剂3.1器材3.1.1玻璃试管:10 mm×75 mm,圆底,洁净,同质。3.1.2 试管架。3.1.3加样器：可调式或定量式，0.05mL～~1.0mL。3.1.4离心机：低速，使用水平转子。3.1.5 水浴锅:37C。3. 1.6 水浴锅：使用时参照附录 B调节水温。3.1.7 吸管:1 mL、2 mL、5 mL、10 mL。3.2 试剂3.2.1试验用蒸馏水为GB/T 6682中的三级水。3.2.2溶血素：冻干品，使用时按说明用蒸馏水溶解。3.2.3抗原：冻干品，使用时按说明用蒸馏水溶解。3.2.4补体：冻于品，使用时按说明用蒸馏水溶解。3.2. 5红细胞悬液：采健康成年绵羊血，以 1 ：1. 2 的比例与 Alsever 氏液混匀,在 4℃保存 5 d 后使用。使用前摇匀后取出需量，用20倍量生理盐水洗涤 3次，每次用离心机以2 000r/min离心5min，最后一次 10 min。取沉淀的红细胞用生理盐水配制成 3%悬液(V /V)。3.2.6标准阳性血清：冻干品，使用时按说明用蒸馏水溶解，并用生理盐水作1：10稀释后 56℃水浴灭能 30 min。3.2.7标准阴性血清：冻于品，使用时按说明用蒸馏水溶解，并作 110稀释后按附录B水浴灭能30 min.3.2.8 被检血清：从被检动物静脉采血，分离血清,不能产生溶血,4℃保存。采血应与皮内变态反应同天进行,若需重复采血,则第二次采血应在皮试后 3 d 内进行。使用前用生理盐水作 1：10 稀释后,按附2002-09-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-03-15批准1 SN/T 1085—2002录 B用水浴锅灭能 30 min。4预备试验4. 1配制标准溶血管(见附录A）4.2 溶血素效价测定4.2.1稀释：取溶血素原液0.2mL加生理盐水 9.8mL混勾，制成100倍稀释的溶血素，再按表1稀释成不同倍数。表1溶血素稀释表试管释梧数1 0002 0003 0004 0005 0006 0007 0008 0009 000成分生理盐水/mL9231t56781 : 100 溶血素/mL11 * 1 000 溶血素/mL1111I14.2.2按表2建立试验，先将溶血素与红细胞混匀，然后加人其他成分。表 2溶血素效价测定表试管号123456189101112稀释格数溶血素补体生理盐1 000|2 000|3 00014 000|5 000]60007 000|8 0009 000成分对照对照水对照溶血素 /ml.0. 250. 250. 250.250.2500. 50. 2503%红细胞/mL0.250.250. 50. 50. 250. 25生理盐水/mL0.750.751.01 : 20 补体/mL0.250.250. 250. 250.250. 250. 250.250. 2500. 2501混匀，37℃水浴15 min，2 000 r/min 离心5 min结果(例)#事册H事H4.2.3判定:对比标准溶血管(见附录 A)进行。表2中*一”为100%溶血，“+”为75%溶血，“++”为50%溶血，