SN_T 4074-2014燕麦全蚀病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4074—2014燕麦全蚀病菌检疫鉴定方法Detection and indentification of Gaeumannomyces graminis var.avenae2014-11-19 发布2015-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局副涂层查真伙 SN/T 4074—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国黄埔出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局本标准主要起草人：莫瑾、龚强、田茜、王昕、白雪、姜金林、周慧平、彭梓、谭建锡、钟国强、章桂明、张祥林、朱金国。I SN/T 4074—2014燕麦全蚀病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了燕麦全蚀病菌（Gaeumannomycesgraminisvar.avenae）的检疫鉴定方法本标准适用于禾本科植物、草本植物的种苗、种子及混杂的植物残体中的燕麦全蚀病菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1809进出境植物种子检疫规程SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样植物病原真菌检测规范SN/T25893燕麦全蚀病菌基本信息学名:Gaemannomydes graminis var.avenae(E.M.Turner)Dennis分类地位：子囊菌亚门（Ascomycotina）、核菌纲（Pyrenomycetes）、球壳菌目（Sphaeriales）、间座壳科（Diaporthaceae）、顶囊壳属（Gaeumannomyces）、禾顶囊壳菌（Gaeumannomyces gramims）。传播途径：病菌以菌丝体在病株组织或病残体在土壤中越冬（越夏）。禾草的整个生育期及其各个部位均可受到侵染。燕麦全蚀病菌的其他信息见附录A。4方法原理根据植株的植株病状进行现场检验，并采用形态学特征、分子生物学和致病性测定对植物种苗、植物种子及混杂的植物残体中的燕麦全蚀病菌进行判定。5仪器和耗材5.1仪器设备PCR仪、超净工作台、体视显微镜、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机，台式小型离心机、超低温冰箱、人工气候培养箱、常规冰箱、旋涡震荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统、酶标仪。5.2主要试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯。PCR缓冲液、dNTPs（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、TaqDNA聚合酶，PDA培养基、PDB培养基、0.001%吐温20-磷酸盐缓冲液见附录B。1 SN/T 4074—20146抽样按照SN/T1809及SN/T2122规定进行取样。7病菌的鉴定7.1种苗检验7.1.1症状检查观察植株是否带有典型或疑似全蚀病的症状，症状见第A.2章。7.1.2形态学特征切取生长有典型或疑似症状植株的染病部位，进行菌丝体和子囊壳的观察，对子囊壳进行徒手切片镜检。菌丝体形态有两种，少数为纤细而灰色，大多数是厚壁、粗壮的黑褐色菌丝，菌丝体常形成黑色的菌丝束、菌丝团，多呈锐角分支、在主支和侧支交界处各产生一横隔形成“入”形的菌丝体（见第C.2章）。瓶梗和瓶梗孢子：较多的是单个的瓶梗侧生在菌丝上，也有松散地集生在菌丝的分支处或菌丝末端呈穗状。瓶梗基部窄缩，中下部较宽、向上渐窄，端部为领带状。瓶梗孢子为（3μm～7μm）×（1 μm～2μm），弯曲呈新月形或半月形。子囊壳埋生于叶鞘内，烧瓶状，有弯曲的柱状喙部伸出于寄主组织之外，子囊壳表面有栗褐色毛绒状物，子囊壳黑色，直径330μm～550μm。子囊2～8个，子囊平行排列于子囊腔内，棒状，无色，直形或弯曲，有多数线状侧丝，子囊大小为（110μm～150μm）×（12μm～16μm）（见附录C.3）。接触液态水时，子囊壁溶化，子囊孢子射出。子囊孢子成束或分散排列，丝状，无色，略弯，多胞有3～7个假隔膜，（110μm～130μm）×（2.5μm～3.5μm）。有时子囊孢子萌发时，产生小形单胞、镰形或新月形分生孢子。7.1.3病原菌的分离培养取待检样品的根、茎基部或叶鞘等部位（如有明显染病症状的部位应取染病部位)切成1cm长的小段，用蒸馏水冲洗掉表面的泥土杂物后，用0.1%次氯酸钠或70%乙醇消毒1min2min，无菌水冲洗3次后，滤纸吸干水分，用灭菌解剖刀横切成1mm～5mm的小片，放置在PD