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夹心法：（检查大分子抗原多采用） 启动发光试剂 (Sp-Ab+Ag?Sp-Ab-Ag)Sp-Ab-Ag+Ab-L?Sp-Ab-Ag-Ab————?hv 其中:L为发光标记物或发光底物, Ag为抗原, Ab为抗体, Sp为固相。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第58页。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第59页。 化学发光免疫技术具有灵敏度高、所需时间短、无放射性污染等优点，现已进入常规临床诊断应用。目前，已有甲状腺功能、生殖生理、肿瘤标志物、药物检测及心血管等四十个检测项目可供临床应用。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第60页。 四. 电致化学发光生物传感器 葡萄糖传感器 GDH ?-D-glucose + NAD+ ?-D-gluconolactone + NADH + H+ ?-D-gluconolactone + H2O D-gluconic acid GDH-glucose dedydrogenas Ru(bpy)32+ → Ru(bpy)33+ + e Ru(bpy)32+* → Ru(bpy)32+ + h ν Ru(bpy)33+ Ru(bpy)32+* reductant 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第61页。 Pump Buffer Auto-Sampler GDH-IMER PMT Flow Cell Waste Potentiostat Photometer Recorder ECL flow system 电极: WE: Pt RE: Ag/AgCl CE: stainless-steel 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第62页。 电极制作 Pt Pretreatment 25μl2.5%Nafion Dry 30 min 0.1M H2SO4,1h 10mM Ru(bpy)32+ 30min 0.1M H2SO4 30min Enzyme immobilization Pore glass (CPG) CPG aminoalkylsilane glularaldehyde GDH 0.1M PBS 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第63页。 Thank you! 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第64页。 八、化学发光的探测 分立式进样化学发光仪 PMT R1 R2 s 这类仪器适合于选择性好, 量子效率高或发光体寿命长的化学发光反应的监测。 不适用于快速化学发光反应(15S)的重现性监测。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第26页。 流动注射进样化学发光仪 样品sample waste PMT recorder 蠕动泵 流通池(flow cell) 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第27页。 九、化学发光分析的特点 优点: 灵敏度高, 线形范围宽； 仪器简单, 价格便宜； 分析时间短。 缺点: 选择性差。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第28页。 电致化学发光 一、电致化学发光现象 电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象。 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第29页。 二、典型的电致化学发光反应. 多环芳烃的ECL 按激发态分子或离子产生的历程可分为两类: 通过单重激发态途径的ECL(S-route ECL) R - e → R.+ 电极氧化 R + e → R. - 电极还原 R. + + R. - → R + 1R* 自由基湮灭 1R* → R + h ν 发光过程 9,10-二苯基蒽,将200Hz 左右的方波电位(1.3 -2.2V vs. SCE)加到电极 DPA - e → DPA. + 1.3 V DPA + e → DPA. - -2.2 V DPA. + + DPA. - → 1DPA* + DPA 1DPA* → DPA + h ν ( λ = 512nm) 化学发光与电化学发光全文共64页，当前为第30页。 通