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第九章体液葡萄糖检验 OGTT 的三个主要环节 1. 测定前的准备工作 2. 血浆（清）葡萄糖测定 3. 糖耐量曲线的解释 第九章体液葡萄糖检验 测定前的准备工作 试验前三天，每日饮食中糖含量不应低于150g，且维持正常活动； 影响试验的药物应在三日前停用； 试验前病人应至少8小时禁食后采血； 采血后5分钟内饮入250ml含75g无水葡萄糖的糖水，以后每隔30分钟取血一次，共四次； 整个试验中不可吸烟，喝咖啡、茶和进食。 第九章体液葡萄糖检验 糖耐量曲线 mmol/L 分钟 第九章体液葡萄糖检验 编号 临床资料 糖负荷后时间(min) 0 30 60 90 120 1 男，65岁，肥胖 8.8 13.8 17.5 16.8 16.7 2 女， 62岁，口腔广泛溃疡 6.0 11.7 15.2 16.4 17.0 3 男， 41岁，糖尿数周 6.7 9.5 10.8 10.1 9.5 4 女， 75岁 5.0 8.6 10.7 11.0 10.2 第九章体液葡萄糖检验 第三节 糖尿病的生化检测 第九章体液葡萄糖检验 一、血糖的测定 （一）标本的采集及处理 1.标本类型： 全血Glu血浆Glu浓度10-15% 静脉Glu动脉Glu7% 毛细血管Glu=静脉Glu（空腹），进食后则不一致 建议：测定静脉血浆葡萄糖较为方便可靠 第九章体液葡萄糖检验 一、血糖的测定 2.采集时间、部位 可取空腹血，餐后2小时血，或随机血， 但意义不同。 对于住院病人尤其要注意采集部位 第九章体液葡萄糖检验 一、血糖的测定 3.标本处理 静脉血+2mg/ml草酸钾（EDTA或肝素）（抗凝） +2-5mg氟化钠/ml血（阻止糖酵解） 新鲜采集的全血室温下最初酵解7%，以后的酵解则减慢，有白细胞增多或细菌时酵解增加。 分离出的血清，25℃下稳定8小时，4℃下稳定72小时。 建议：无防腐剂的全血必须在1小时内分离出血清或血浆，并及时测定。 第九章体液葡萄糖检验 二、测定方法 1.化学法 铜还原法 芳香胺缩合法（邻甲苯胺法） 2.酶法 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（临检中心推荐） 己糖激酶法（参考方法） 3.葡萄糖氧化酶氧消耗法—氧电极分析 第九章体液葡萄糖检验 二、测定方法 1.铜还原法 原理：Glu + Cu2+ Cu+ Cu+与磷钼酸反应生成钼蓝（ Folin-Wu法，） Cu+与砷钼酸反应生成钼蓝（ Somogyi-Nelson法） 评价： 血中肌酸、肌酐、尿酸和非糖还原性物质（谷胱甘肽，VitC 等）均干扰测定结果，产生假阳性，因此特异性低。 操作较繁琐，一般必须制备无蛋白滤液。 第九章体液葡萄糖检验 二、测定方法 2.邻甲苯胺法（O-T法） 原理：Glu + O-T Δ 缩合、脱水 Schiff碱 蓝绿色化合物（630nm） 评价 1.此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。一般不宜以校正曲线法进行计算，故每次应同时作标准管。 2.邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度，并有一定的增色效应。 第九章体液葡萄糖检验 邻甲苯胺法操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 0.1 - - 葡萄糖标准液 - 0.1 - 血清/血浆/脑脊液 - - 0.1 邻甲苯胺试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷却3min， 在630nm处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。 第九章体液葡萄糖检验 二、测定方法 3.葡萄糖氧化酶法 原理：Glu + H2O GOD H2O2 + 葡萄糖酸 H2O2 + 4-氨基安替比林 +酚 POD 红色醌类化合物（520nm） 评价： 特异性高，操作简单，结果可靠，是我国临检中心推荐方法。 还原性物质谷胱甘肽，VitC 、胆红素等干扰测定结果，因此特异性低。 第九章体液葡萄糖检验 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 试剂组成: 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 2．酶试剂 3．酚溶液 4．12mmol/L苯甲酸溶液 5．5mmol/L葡萄糖标准液 第九章体液葡萄糖检验 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血清 - - 0.02 葡萄糖标准液 - 0.02 - 蒸馏水 0.02 - - 酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色， 以空白管调