细胞培养中污染物的预防与清除 .pptVIP

细胞培养中污染物的预防与清除 培训班目的： 提高各生物资源保藏库在资源保藏、评价方面的科技创新与服务能力。 资源保藏、评价 创新能力 服务能力 （科学院对我们的要求） ? 十八大明确提出要“实施创新驱动发展战略，强调科技创新是提高社会生产力和综合国力的战略支撑，必须摆在国家发展全局的核心位置”。 ? 我国科技服务业已经具备一定的发展基础，但是与英、美等发达国家相比，我国的科技服务业产值及其占GDP比重较低，2011年度实现科技服务增加值不足7000亿元，占GDP比重约为1.4%。 ? 2014年10月，国务院印发《关于加快科技服务业发展的若干意见》（国发〔2014〕49号），这是国务院首次对科技服务业发展作出的全面部署。 用创新驱动科技服务业的发展 （国家对我们的要求） 细胞资源为生物医药基础研究和产业发展提供支撑和保障 细胞资源保藏和技术研发 人类遗传资源库 基础研究实验细胞库 国家发展和安全战略 一， 细胞系是重要的遗传资源。细胞库的功能包括资源保藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这三方面的提升是建设一流细胞保藏单位的关键抓手，也是推动细胞库向科技服务业转移重心的必经之路。 二， 保证细胞株不受污染是细胞库保藏能力的关键性标志，也是其他能力提升的基础。 一， 细胞系是重要的遗传资源。由细胞库（Cell Bank）负责保存细胞系。 细胞库 技术咨询 对外供应 鉴定检测 文档管理 细胞培养 质量控制 保藏、评价 开放、共享 技术服务 培训科普 一， 细胞系是重要的遗传资源。负责保存细胞系的细胞库应当开发、承担更多的功能，提升服务科技、服务社会的能力，产生更高的服务业产值。 细胞库 技术咨询 对外供应 鉴定检测 文档管理 细胞培养 质量控制 保藏、评价 开放、共享 技术服务 培训科普 拓宽收集渠道 提升保藏特色 瞄准科技发展前沿提升利用开发水平 一， 细胞系是重要的遗传资源。保存细胞系的细胞库其功能包括资源保藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这三方面的提升是建设一流细胞保藏单位的关键抓手。 中科院细胞库 坚持国际接轨的细胞保藏技术水平，积极吸引国内有知识产权的细胞系进入细胞库保藏，逐步形成自己的特色。 坚持用户至上的服务态度，全方位为用户着想为用户服务，积极推动库内细胞资源的利用。 密切关注国际细胞生物学发展前沿，主动与医院等单位合作，拓宽细胞资源的种类，为我国细胞生物学的进一步发展做好准备。 我们的目标 二，污染是细胞培养的大敌。保证细胞株不受污染是细胞库保藏能力的关键性标志，也是其他能力提升的基础 1，细菌污染 2，真菌污染 3，支原体污染 4，内毒素污染 5，细胞间交叉污染 1，细菌污染。 实验室中因操作不慎而引起的污染，即使在细胞培养液中加入了预防剂量的抗菌素也会产生。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌，以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成实验失败和细胞株(系)丢失。 2，真菌污染 在细胞培养过程中较为常见，尤其在南方霉雨季节进行细胞培养更易产生。最常见的真菌有：烟曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌等。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色小点，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。 3，支原体污染 3.1，支原体污染是目前实验室中最为常见的污染细胞的原核生物。 因支原体属于直径介于0.2左右的最小原核生物，形态易变，故极易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。在细胞培养液中，支原体可达到107-108CFU/mL （CFU=Colony Forming Unit，支原体浓度测量单位）而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生任何病变效应，使得细胞污染不易被察觉。据报道，目前世界上有30-50%的细胞株已受支原体污染。但是支原体对干细胞培养的影响甚大，胚胎干细胞受支原体污染形态、生长速度等均出现改变。 在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。 由于多数细胞受支原体污染后无明显变化或略有变化，若不及时处理，将产生交叉污染。另外，支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征，因此尽管很多受支原体污染的细胞其形态看不出变化，但对其进行进一步分子生物学分析时，