阿拉尔市梨黑斑病的病原鉴定及室内药剂筛选.pdfVIP

  摘要 目的：近年因黑斑病的发生使库尔勒香梨生产遭受严重危害。本研究对引起库尔勒 香梨的黑斑病病原进行了种类鉴定和药剂筛选，为黑斑病的防治提供依据。 方法：在新疆阿拉尔市梨园随机采集表现明显黑斑症状的库尔勒香梨病果 41 个， 采用常规组织分离法对病果进行真菌的分离与纯化；将分离获得的菌株通过无伤和有伤 接种健康梨果和枣果进行致病性鉴定；同时对梨园附近发生的枣黑斑病采集感病枣花9 株，通过同样的方法进行真菌的分离与致病性鉴定。通过菌落表型对表型差异明显的病 原菌进行初步分类，筛选代表菌株。通过分生孢子的产生方式、分生孢子的大小、纵横 隔膜数等形态特征对代表菌株进行形态学鉴定；基于过敏原基因（Alt-a1 ）、RNA 聚合 酶Ⅱ的第2 大亚基基因（rpb2 ）、钙调蛋白基因（Cal）、翻译延长因子基因（tef1 ）、 　-微管蛋白基因（tub ）和 OPA2-1 序列分别构建单基因和多基因联合系统进化树，对 代表菌株进行系统发育分析。最终结合形态学与系统发育分析将病原菌鉴定到种。在 PDA 培养基中添加农药，通过农药对真菌生长的抑制率进行农药筛选。 结果： 1、菌株分离结果显示，从感病梨果的病组织中分离获得36 株真菌菌株，根据菌落 特征和分生孢子形态进行初步判定，链格孢34 株，青霉菌2 株，分别占分离菌株总数 的 94.4 %和5.6% 。从感病枣花中成功分离6 株真菌菌株，全部为链格孢。 2 、对34 株梨上分离到的链格孢菌株和6 株枣链格孢菌株分别在库尔勒香梨和枣果 上进行无伤和有伤接种。结果显示，梨黑斑病致病链格孢有伤接种3 d 和无伤接种5~7 d 均可在库尔勒香梨的接种部位引起与田间相似的黑褐色坏死病斑，并能在枣果上引起同 样的黑褐色病斑；同样，枣链格孢也能通过无伤和有伤接种在库尔勒香梨上引起与田间 相似的黑斑病症状。结果表明，梨黑斑病致病链格孢和枣黑斑病致病链格孢能够相互侵 染，均是导致库尔勒香梨黑斑病的致病病原。 3、根据培养形状的差异，选取P3 、P8 、P21 、P26 进行种类鉴定。P3 和P8 菌株的 分生孢子梗具分支，分生孢子短链生，孢子链一般由10 个以内孢子构成；P3 菌株的支 链较短，由1~4 个孢子构成短分支，分生孢子平均大小为9.5 × 19.1 μm，具1~3 个横膈 膜；P8 菌株分生孢子大小平均为9.3 × 20.3 μm，具2~5 个横膈膜。P21 和P26 菌株形态 相近，分生孢子长链生，一般由 10 个以上孢子构成，孢子链多不分支；分生孢子平均 大小分别为12.7 × 25.9 μm 和11.0 × 27.4 μm，具3~7 个横膈膜。基于Alt-a1 、rpb2 、Cal、 tef1、tub 基因和 OPA2-1 序列对4 个代表菌株分别进行单基因和多基因系统发育分析， 再结合形态学特征，最终将P3 菌株的种类鉴定为乔木链格孢（Alternaria arborescens ）、 I      P8 菌株的种类鉴定为交链格孢（Alternaria alternata ），P21 和P26 菌株的种类鉴定为 细极链格孢（Alternaria tenuissima ）。 4 、药剂筛选结果显示，25%咪鲜胺稀释 100 倍对链格孢抑菌效果最好，抑菌率为 87.1%；其次为40%氟硅唑稀释8000 倍，抑菌率为85.8%；32%苯丙ꞏ甲环唑稀释100 倍 对链格孢生长抑制率为83%；72%霜脲ꞏ锰锌抑菌效果最差，稀释150 倍对链格孢抑制为 69.6% 。 结论：引起库尔勒香梨黑斑病的病原菌种类是 Alternaria arborescens 、Alternaria alternata 和Alternaria tenuissima ；梨黑斑病致病链格孢和枣黑斑病致病链格孢互为库尔 勒香梨黑斑病和枣黑斑病的致病病原。25%咪鲜胺和40%氟硅唑对梨黑斑病菌具有较好 的抑菌效果。 关键词：梨黑斑病；链格孢；多基因联合建树