临床微生物学检验实验第二周.pptxVIP

临床微生物学检验实验第二周;实验内容;目的要求;第一天实验内容;常用指示剂变色范围;碳水化合物代谢试验;指示剂为溴甲酚紫 结果： 　　　　　　　 产酸：分解糖(苷、醇)产酸， 培养基变黄色＋ 产酸产气：培养基变黄且出 现气泡＋ 无变化：－;甲基红试验原理：某些细菌在代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步被分解为乳酸、乙酸、甲酸等，而使培养基的pH值下降至4.5以下，故加入甲基红指示剂出现红色（阳性）。有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质如醇、酮、醛、气体和水，则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色（阴性） ;VP试验 MR试验 ;VP试剂： 甲液：6%α-萘酚酒精溶液。 乙液：40%KOH溶液、0.3%肌酐。 结果判定：阳性:红色 阴性:黄色/棕色（再置35℃0.5～1小时后观察） MR结果与VP结果相反;3、硫化氢试验;4、吲哚试验 原理：细菌分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色 结果：反应结束加试剂数滴，两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性 ;原理：以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，若细菌能利用这些盐作为碳源和氮源而生长，则利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的NH3反应，形成 （NH4）2CO3，使培养基变碱，pH升高，指示剂溴麝香草酚蓝由草绿色变为深蓝色 结果: 阳性:蓝色; 阴性:绿色 培养基：枸橼酸盐培养基;6.克氏双糖铁培养基(Kligler Iron Agar,KIA);未接种菌的KIA;各种生化培养基接种的细菌;;第二天实验内容;- +; + 无色 红色;加试剂后观察;乳（+） 葡（产酸产气）H2S(-);乳（-）葡（+）H2S(+);乳（－）葡（＋）H2S(-);KA-+;原理： ;原理：若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶， 能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸，苯丙酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色 加入苯丙氨酸脱氨酶试剂:10%FeCl3 阳性:培养基与试剂接触处出现绿色 阴性:不变色 培养基：苯丙氨酸培养基;2、尿素酶试验;2、尿素酶试验;原理：不同细菌对葡萄糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，仅在有氧条件下能分解称为氧化型，在有氧无氧条件下均能分解称为发酵型，两种条件下均不分解称产碱型。 结果判定:仅在没有覆盖石蜡油的一管分解糖产酸或产酸产气者属氧化型；两管均分解糖产酸或产酸产气者为发酵型；两管都不生长者为产碱型。 指示剂：溴麝香草酚蓝或溴甲酚紫 培养基：Hugh-Leifson培养基 ;氧化－发酵试验（OF）;4、氨基酸脱羧酶试验;原理：;原理：细菌如果能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中的对氨基苯磺酸生成对偶氮苯磺酸，对偶氮苯磺酸再与试剂中的α-萘胺反应，生成可见的红色N-α-萘胺偶氮苯磺酸。 硝酸盐还原的过程可因细菌的不同而异， ①有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；②有的细菌使硝酸盐还原为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解成为氮，此时加入硝酸盐还原试剂不显色，但可以在培养基的小倒管中出现气泡，如假单胞菌等。硝酸盐或亚硝酸盐如果被还原成气体的终未产物如氮或氧化氮，就称为脱硝化或脱氮化作用。 ;硝酸盐还原试验;甲液：甲基α-萘胺 乙液：对氨基苯磺酸 培养后加试剂：甲液、乙液各一滴 阳性:红色 阴性:无色 在无色的培养基中再加入锌粉，变成红色为阴性，不变色为阳性。; 6、DNA酶试验  DNA酶 原理： 长链DNA 寡核苷酸链 （可被酸沉淀） （可溶于酸） 方法：点种;实验内容：各种培养基接种细菌;第三天实验内容;OF试验 发酵型 氧化型;苯丙氨酸脱胺酶试验 ＋ －;尿素酶试验 － ＋;硝酸盐还原试验 － ＋;;为什么氨基酸脱羧酶试验管要加石蜡油？ 为什么氨基酸脱羧酶试验设对照管？;对照管主要成分：蛋白胨、葡萄糖和溴甲酚紫指示剂（不含氨基酸） ; － ＋;1、氧化酶试验原理： 盐酸二甲基对苯二胺（无色） 紫红色的醌类化合物 OR 盐酸四甲基对苯二胺（