云南花生叶斑病病原菌的分离鉴定木.pdf

维普资讯 花 生 学报 2003，32(增刊 )：4l5~4l7 ．，0啪 aJofPeanutScience，Vo1．32，sup，2003 文章编号：1002-4093(2003)增刊 一0415—03 云南花生叶斑病病原菌的分离鉴定 木 张庆滢，杨丽英 (云南省农业科学院油料作物研究所，云南 昆明650205) 摘要 ：对云南省花生的叶斑病病原茵作了分离和鉴定，于花生成熟期从病株的叶部取样分离出花 生叶斑病病菌株 10个 ，经分离、培养和鉴定，结果表 明：4个菌株是 CercosporaarachidicolaHod，3 个菌株是 Phaeoisariopsispersonam(Berk＆Curt)V．Arx，回接试验结果表 明：云南花生叶斑病病原 菌为 CercosporaamchidicolaHori和 Phaeoisariopsispersonata(Berk＆Curt)V．Arx。 关键词 ：花生；早斑病；晚斑病 中图分类号 ：$565．2$435．652 文献标识码 ：B 花生叶斑病有早斑病和晚斑病两种，在我国它们又分别被称为褐斑病和黑斑病。是世界 上分布最广泛 、最具普遍重要性的花生病害 1【]，主要发生在花生成熟期 ，感病花生一般减产 4％～15％，严重时可达 30％以上，国内在花生叶斑病育种上所作的工作较少，一方面是 由于抗 原较为缺乏 ，一方面也是抗性育种的难度很大。 引起 叶斑病的病原在云南省的情况还未见报道。对云南的花生叶斑病病原菌进行分离、 鉴定 ，不仅能为云南省花生种质资源进行抗病性鉴定，发掘新抗源 ，加快抗病育种工作进程提 供科学依据，对我省叶斑病的综合防治技术措施的设计也具有重要意义 。 1 材料与方法 1．1 1共试材料 供试材料为弥勒本地种。于 1999年 8月花生成熟期田间采集病叶，采样用的纸袋及有关 工具 (剪刀、镊子等)均事先灭菌消毒，采样时操作者的手也进行消毒，将样 u1放入采样袋后 ， 封 口编号。 1．2 样品的分离、培养和鉴定 1·2·1 病菌的分离和培养 一切按常规无菌操作。选择新近有病状 的植株病叶作为组织 分离材料，将带有病灶的叶剪下约 0．5cm2见方的方块，按下列程序进行表面消毒： 75％N精漂洗 5s——无菌水漂洗 1min——0．1％升汞漂洗 3min——无菌水冲洗 5次2【] 将上述表面消毒后的材料，按编号放入马铃薯葡萄糖 (或蔗糖)平板培养基 (PDA)上， 于 28℃温箱中培养 3～7d即可见方块样 品的刀 口边缘处有菌丝长 出，再进一步纯化，将纯培 ’收稿 日期：2003—08—15 作者简介：张庆滢 (1973一)，女，云南巍山人，云南省农业科学院池料作物研究所助理研究员 ， 大学 ，主要从事花生弓1育 种 研究。 维普资讯 416 花 生 学 报 32卷 养物转接到PDA斜面上，于28℃温箱中培养 7d，待菌丝长好或长出孢子时，挑取少许菌丝或 孢子，用乳酸石碳酸液制成封片和载片培养观察。注意分生孢子和分生孢子梗状况等，结合原 染病状况及菌落特征按有关文献 【资料进行分类鉴定。 1．2．2 直观制片观察 将感染部分的叶片剪下约0．5cm：的方块放入加有乳酸酚溶液的 试管中，用微火煮沸 30min至叶片透 明，然后制成封片置于显微镜下观察病菌侵入植物组织 细胞 的状况 。 1．3 回接试验 选择无病盆栽幼苗 (每盆4株)，取 PDA斜面生长旺盛的菌株制成孢子悬浮液，浓度约 为200倍，显微镜下有孢子 20--30个 ／视野，于花生 (弥勒本地种)生长45d后用喷雾器喷雾 接种，每一种菌接种 2盆，套塑料袋在25％保持高湿 24h，并设对照。接种前将花生盆摆好、浇 水，然后覆膜，随后注意观察病菌在叶片上的侵染及生长情况。