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子囊菌门无性产孢brlA基因家族系统发育分析 　　摘要：无性产孢基因brlA在子囊菌产孢的中心调控通路中控制分生孢子梗的形成，brlA基因的激活是曲霉属真菌产孢的一个关键步骤。以子囊菌门已测序的无性产孢brlA基因家族的60条核苷酸序列为材料，用邻接法、最小进化法构建系统发育树，分析该基因家族在子囊菌中的演化关系。结果表明：以brlA基因家族序列所构建的系统发育树共形成了稳定的、高支持率的Ⅰ～Ⅳ共4个大分支；该系统发育树又可细分为以子囊菌8个目为代表的8个小分支，即爪甲团囊菌目（Onygenales）、刺盾炱目（Chaetothyriales）、格孢腔菌目（Pleosporales）、肉座菌目（Hypocreales）、小丛壳目（Glomerellales）、粪壳菌目（Sordariales）、柔膜菌目（Helotiales）、散囊菌目（Eurotiales）。由结果可知，子囊菌门无性产孢brlA基因家族的演化与子囊菌高级分类阶元目的演化相对应，为子囊菌门不同类群间分生孢子梗演化学方面的研究提供可靠的分子证据。 　　关键词：子囊菌门；无性产孢；brlA；基因家族；系统发育树 　　中图分类号： S182 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0048-04 　　无性孢子的形成是大多数子囊菌最常见的繁殖方式，包括特定的细胞分化、基因表达的时空调控和细胞信号转导[1]。分生孢子是高等真菌的无性孢子，对保持长期生存发育有重要作用[2]。 　　子囊菌门曲霉属的分生孢子在分生孢子梗上形成[3]，分生孢子梗的形态是曲霉属一个重要的分类学依据。构巢曲霉分生孢子的形成在形态学上被分为几个不同的阶段[4]：首先是基细胞分支出气生梗，然后梗的尖端开始肿胀形成多核囊泡；在囊泡表面形成2层小梗，分别是梗基、瓶梗；最后，瓶梗经历了重复的不对称的有丝分裂，产生了分生孢子链。产孢的整个过程都是特定的，并且不同的基因组合在每个阶段行使的功能不同[5]。 　　brlA、abaA、wetA这3个基因组成调控分生孢子特定基因表达的中心调控通路，并决定分生孢子梗形成、孢子成熟过程中基因激活的顺序[6]。brlA基因的激活是曲霉属产孢的一个关键步骤，brlA在从分生孢子梗极化的顶端生长到囊泡肿胀的转型期是必需的[7]。敲除brlA的突变体形成刚毛状的结构，产生1个细长的梗，从而不能产生囊泡或者其他后续的产孢结构[8]；相反，brlA在生长的细胞中超表达会导致生长中断，并且从菌丝尖端直接形成可育的分生孢子[9]。brlA有1个复合结构，包含2个重叠的转录本brlAα、brlAβ，在分生孢子发育过程中起着不同的作用[10]。BrlA蛋白主要定位于囊泡或小梗上。AbaA是瓶梗分化的主要成分，在分生孢子发育中期阶段被BrlA激活[11]。wetA基因在分生孢子形成的晚期被AbaA诱导，并且在使分生孢子成熟的过程中起重要作用[12]。 　　子囊菌门绝大多数都可产生无性的分生孢子，但是分生孢子的产生方式、形态有很大差别，而控制其产生的关键基因brlA基因家族在不同类群中的系统发育关系对揭示其孢子产生方式和形态的不同有重要价值，也为该基因家族基因的分子演化提供数据支撑。因此，本研究从GenBank中下载子囊菌门8个目的brlA基因家族的60条核苷酸序列，用邻接法、最小进化法构建子囊菌门brlA基因家族高级分类阶元的系统发育树，并对其系统发育关系进行分析。 　　1 材料与方法 　　1.1 brlA基因的核苷酸序列 　　brlA基因的核苷酸序列来自GenBank数据库，通过该数据库下载子囊菌8个目中60条含有brlA基因的核苷酸序列，其中散囊菌目（Eurotiales）15条，爪甲团囊菌目（Onygenales）9条，肉座菌目（Hypocreales）7条，格孢腔菌目（Pleosporales）8条，刺盾炱目（Chaetothyriales）、粪壳菌目（Sordariales）各6条，小丛壳目（Glomerellales）5条，柔膜菌目（Helotiales）4条（表1）。 　　1.2 序列分析 　　对所下载序列按照GenBank登录号进行重命名后，用MEGA 6软件[13]中的ClustalW进行比对后剪切。 　　1.3 系统发育树的构建 　　用MEGA 6软件[13]，采用邻接法、最小进化法对已剪切的序列进行系统发育树的构建，bootstrap值重复1 000次，隐藏50%以下的支持率。 　　2 结果与分析 　　2.1 brlA基因的系统发育分类 　　利用邻接法、最小进化法对brlA基因的核苷酸序列所构建的2个系统发育树的拓扑结构基本一致。由邻接法对核苷酸序列所构建的系统发育树（图1）可以看出，所构建的子囊菌门无性产孢br