第十七章基因重组与基因工程PPT.ppt

第十七章 重组DNA技术;基因决定性状（一）;基因决定性状（二）;定向基因改造设想 ;DNA重组;第一节 重组DNA技术的主要工具;重组DNA技术必备工具;其它工具酶;一、 限制性核酸内切酶;限制酶的分类;限制酶的识别和切割位点; 末端种类 １）３’-粘性末端 Pst I ２）５’-粘性末端 EcoRI;限制酶的应用;二、载 体;载体分类 克隆载体 用于克隆和扩增目的基因的载体 基本特点: 1、复制起点 2、克隆位点（多克隆位点），供外源DNA插入 3、选择标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞 4、具有较小的分子量和较高的拷贝数 5、易导入受体细胞 ?注：前三个特点必不可少;表达载体 用于表达外源基因，合成目的蛋白的载体 除具有克隆载体基本原件外，还应具备表达元件 原核：启动子－核糖体结合位点－转录终止信号 真核：增强子－启动子－终止信号－ＰolyＡ信号 ;质粒载体;质粒;特点： 1、分子量较小，为4361bp，可容纳的外源DNA较大 2、一个复制起点，具氨苄青霉素抗性（ampR)和四环素抗性基因(tetR) 3、克隆位点位于氨苄青霉素抗性（ampR)或四环素抗性基因(tetR)内，插入外源基因后可导致相应基因失活 ;载体pBR322的结构图;pUC系列;pUC18和pUC19载体;第二节 重组DNA技术的基本原理;基本操作;一 获取目的基因;⑵ 制备cDNA cDNA文库 ;⑶ 聚合酶链 反应（PCR） 合成 DNA模板 引物 dNTP Taq DNA聚合酶 ⑷ 人工合成 ;二 目的基因和载体连接;3. 加同聚物尾连接;4. 加人工接头连接;重组DNA导入宿主细胞的过程称转化 细胞类型： 原核细胞 大肠杆菌 链球菌 枯草杆菌 真核细胞 酵母 昆虫细胞 哺乳动物细胞;平板筛选 插入失活;2. 酶切鉴定 3.PCR分析;4. 核酸分子杂交分析;美国生物制药产品种类及数量（PHRAM）;生物技术与传统中药;谢谢大家!