枯草芽孢杆菌M6和木霉10对番茄灰霉病防治效果研究.docVIP

枯草芽孢杆菌M6和木霉10对番茄灰霉病防治效果研究 　　摘要：分别研究了枯草芽孢杆菌M6、木霉10和两者配成的复合菌剂W对番茄灰霉病的防治效果，测定了它们对番茄灰霉病的抑制作用。结果表明，枯草芽孢杆菌M6、木霉10、复合菌剂W对番茄灰霉病均有抑制作用，但复合菌剂W对番茄灰霉病抑制作用更强，抑制率达到62.2%，且复合菌剂W的使用浓度不能低于105 cfu/mL。田间防治试验结果表明，复合菌剂W对番茄灰霉病的防治效果良好，随浓度的增加防效不断提高，以800倍液的防效最好，连续2次施药后防效在80%以上，复合菌剂W 800倍液防效明显优于75%百菌清可湿性粉剂800倍液，复合菌剂W 1 000倍液防效与75%百菌清可湿性粉剂800倍液的相当。复合菌剂W 800倍液和1 000倍液均可代替化学药剂，以减小农残和环境污染。 　　关键词：枯草芽孢杆菌M6；木霉10；番茄灰霉病；防治效果 　　番茄灰霉病是一种世界性的重要病害，且为害较重，番茄灰霉病的防治已成为保证生产发展的关键性措施[1]。目前防治番茄灰霉病主要采用化学药剂，如苯并咪唑类的多菌灵、甲基硫菌灵，二甲酰亚胺类的腐霉利、异菌脲以及N-苯氨基甲酸酯类的乙霉威[2]。长期、连续使用化学药剂使病原菌逐渐产生了抗药性，影响防治效果，同时易造成农药残留、环境污染等问题[3，4]。据张传清等[5]报道，设施蔬菜灰霉病菌对百菌清、多菌灵、腐霉利、异菌脲、乙霉威、嘧霉胺均产生不同程度的抗药性。因此，利用拮抗菌防治番茄灰霉病日益受到国内外研究者的重视，国内在这一方面陆续有研究报道，以枯草芽孢杆菌为主，也有用木霉防治番茄灰霉病的研究[6]。但单独用细菌或真菌防治番茄灰霉病容易受到病菌的变异影响，降低防效，而应用拮抗细菌和拮抗真菌联合防治番茄灰霉病，则可有效提高防治效果。 　　本研究以本课题组分离出的1株木霉10 （Trichoderma 10）和1株枯草芽孢杆菌M6（Bacillus subtilis M6）菌株的发酵液，及2种菌的发酵液混合后制得的复合菌剂W为材料，对番茄灰霉病进行了防治试验。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　木霉10菌株与枯草芽孢杆菌M6菌株由陕西省科学院酶工程研究所从土壤中分离保存。有效活菌数，枯草芽孢杆菌M6为1.0×1010亿个/mL，木霉10为1.0×1010亿个/mL，将2种菌的发酵液按1∶1比例配成复合菌剂W，自行生产。对照药剂为75%百菌清可湿性粉剂。 　　番茄灰霉病菌灰葡萄孢菌MB1从临潼地区的番茄病果上分离、纯化得到。 　　番茄品种毛粉802由西安市蔬菜所培育。 　　试验地点在西安市临潼区任留乡的无公害蔬菜示范基地。试验期间大棚温度15~25℃。 　　1.2 番茄灰霉病的抑制试验设计 　　将灰葡萄孢菌MB1配制成浓度为1.0×109 cfu/mL菌液，并制成含菌平板。将木霉10、枯草芽孢杆菌M6和混合菌剂W分别接种在平板上，于25℃培养5 d后分别测定抑菌圈直径，并计算抑菌率。每个处理重复4次。 　　1.3 复合菌剂W防治番茄灰霉病的最佳浓度的研究 　　吸取混合菌剂W培养液2 mL至18 mL灭菌后的PDA培养基中，制成不同浓度的含菌平板，以加入2 mL无菌水的处理为对照。 　　将制备好的灰葡萄孢菌MB1菌盘移植到上述平板中，每皿1块，4次重复，倒置，于25℃培养24 h，采用十字交叉法测量菌落直径，取平均值，计算抑菌率。 　　1.4 田间防治试验 　　①田间小区设计 田间试验中将复合菌剂W稀释成800倍液、1 000倍液、2 000倍液使用，喷施2次，每次药液用量30 L/667 m2；对照药剂75%百菌清可湿性粉剂800倍液，用量170 g/667 m2，分2次喷施。以清水处理为空白对照。共5个处理，4次重复，每小区面积为12 m2。小区间及试验田间周围设保护行。②施药时间 于2010年4月15日第1次施药（发病初期），2010年5月10日第2次施药。 　　③病情调查方法 分别在喷药前1 d和喷药后1周调查叶片上的病害严重程度，计算病情指数和防治效果。每小区在对角线上取5点，每点调查2株，调查各植株全部叶片。 　　分级方法，0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积5%以下；3级：病斑面积占整个叶面积6%～10%；5级：病斑面积占整个叶面积11%～20%；7级： 　　病斑面积占整个叶面积21%～40%；9级：病斑面积占整个叶面积40%以上[7]。 　　计算病情指数，病情指数=100×∑（各级病叶数×相对级数值）/（调查总数×9），防治效果（%）=[1-（CK0×PT1/CK1×PT0）]×100%。 　　其中，CK0为空白对照小区施药前病情指数，CK1为空白对照小区施药后病情指数，PT0为药剂处理小