血小板裂解液复合脂肪来源干细胞促进腱骨愈合的实验分析-experimental analysis of platelet lysate combined with adipose-derived stem cells to promote tendon bone healing.docx

中文摘要 血小板裂解液复合脂肪来源干细胞促进腱骨愈合的实验研究 然后分三组：空白对照组，TGFB3 组，PL+TGFB3 组分别进行 ADSC 的成软骨诱导 培养。使用阿里新蓝染色测定检测细胞分泌的蛋白聚糖含量，同时行 II 型胶原免疫 荧光检测确定其表达，在各个时间段行 qPCR 检测 II 型胶原 mRNA 表达，在 4w 时 行 OCN 的 mRNA 表达。结果：在 48h 后，可见各浓度 PL 组有数量不一的 ADSC 附着与 Transwell 纤维 膜，5%PL 组细胞迁移能力显著大于其它各组。成软骨诱导后阿里新蓝染色见 PL+TGFB3 组和 TGFB3 组均匀蓝染，II 型胶原免疫组化提示 2w 及 3w 时对照组无染 色，而 TGFB3 组在 2w 及 3w 时均有 II 型胶原染色，PL+TGFB3 组在 2w 和 3w 时染 色丰富。qPCR 检测提示对照组与 TGFB3 或者 TGFB3+5%PL 相比，mRNA 表达量要 小，2w，3w，4w 的 P 值小于 0.001，有统计学差异。TGFB 诱导与 TGFB3+5%PL 诱 导，2w 时 P0.05，3w 时 P0.001，4w 时 P0.01，均有统计学差异，后者 mRNA 表 达量大于 TGFB3 诱导组。OCN 的 mRNA 无统计学差异。结论：PL 对 ADSC 的促进迁移作用有浓度依赖，5%PL 对 ADSC 具有较强的促 迁移作用，特定环境下能促进软骨定向分化，其作用优于单纯使用 TGFB3，且不会 发生成骨分化。关键词：血小板裂解液，脂肪来源干细胞，成软骨分化，qPCR第三部分血小板裂解液复合脂肪来源干细胞对大鼠跟腱腱骨愈合界面的影响目的：探讨 5%PL 复合 ADSC 对腱骨结合处的愈合影响，观察其是否能促进纤 维软骨形成，从而从组织学以及生物力学方面改善腱骨愈合质量。方法：建立大鼠跟腱腱骨愈合模型，清理跟腱止点后分三组，假手术组（G1）， ADSC 组（G2），ADSC+%PL 组（G3），分别进行治疗。然后使用 HE 染色、Masson 染色以及阿利新蓝染色进行组织学观察，在 2w、4w、6w 时分别提取腱骨组织，进 行 qPCR 检测 II 型胶原含量。并在 2w、4w、6w 时测定生物力学变化。结果：HE 染色见 G1 组 6w 时止点处为 Sharpy 纤维，而 G2 组 6w 时形成潮线，G3 组 4w 时有潮线形成，6w 时可见典型四层结构止点。Masson 染色见 6w 时 G1 组血小板裂解液复合脂肪来源干细胞促进腱骨愈合的实验研究 中文摘要 纤维组织疏松紊乱，胶原纤维波浪样,杂乱排列。G2 组纤维组织排列较好，胶原纤维 边界清晰。而 G3 组胶原纤维整齐排列，钙化软骨与纤维软骨结合紧密。行阿利新蓝 染色，G1 组 6w 可见止点愈合，软骨细胞周围有蓝染，钙化软骨处有钙质沉积， G2 组可见软骨周围蓝染较多，软骨细胞椭圆形，而 G3 组软骨细胞周围蓝染较深，说明 蛋白聚糖含量丰富。各图像蓝染值统计学分析示 G3 显著高于其它两组。qPCR 检测在各时间段，G1 组 II 型胶原 mRNA 表达量均显著小于 G2 组和 G3 组，在 2w 时 G2 组 II 型胶原 mRNA 表达量与 G3 组相似，但是 4w 和 6w 时均显著小于 G3 组。生物 力学检测 2w 时 G1 组的最大拉力载荷最低，与正常腱骨组织相比有显著性差异，而 同时 G2 组和 G3 组比 G1 显著增加。但此时 G2 组和 G3 组的最大拉力载荷与正常腱 骨组织相比均显著下降。各组的最大拉力载荷随时间而增加。6w 时 G2 和 G3 组的最 大拉力载荷显著大于 G1。同时在 6w 时，G3 组的最大拉力载荷显著大于正常腱骨组织。 结论：PL 复合 ADSC 时，促进 ADSC 向软骨细胞分化，同时促进周围干细胞迁移，促进腱骨愈合，改善愈合质量，获得较好的生物力学性能。 关键词：血小板裂解液，脂肪来源干细胞，成软骨分化，腱骨愈合作者：茅泳涛 指导教师：董启榕英文摘要血小板裂解液复合脂肪来源干细胞促进腱骨愈合的实验研究Pletelet lysate combined with adipose-derived stem cells promote tendon-bone healing：an experimentalStudy of rat AbstractPart 1 Pletelet lysate promote the culture of adipose-derived stem cells in non-serum culture mediumObjective To study the changes of platelet lysat