重组aFGF乳酸菌构建表达及其对小鼠溃疡性结肠炎药效研究.docVIP

重组aFGF乳酸菌构建表达及其对小鼠溃疡性结肠炎药效研究 　　摘要：采用分子克隆技术构建携带人酸性成纤维细胞生长因子（ａｃｉｄic ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ， ａＦＧＦ）基因序列的乳酸菌重组表达载体ｐＧＭＮ４，转化并筛选出高效表达ａＦＧＦ的重组菌株，制成活菌制剂。口服５％葡聚糖硫酸钠（ＤＳＳ）溶液７ｄ诱导小鼠溃疡性结肠炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ， ＵＣ），在造模同时分别给予高、中、低剂量活菌制剂灌胃１７ｄ。通过比较小鼠的毛色、体重、便血、结肠长度、病变组织的髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ， ＭＰＯ）活性，以及观察结肠组织病理形态学变化，验证重组ａＦＧＦ乳酸菌对ＤＳＳ诱导的小鼠ＵＣ的预防和治疗效果。实验结果表明，重组ａＦＧＦ乳酸菌的表达量可达５０μｇ／ｍＬ，高剂量重组活菌制剂能够显著改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短，促进组织修复，保持结肠结构的完整性，并下调ＭＰＯ的活性。重组ａＦＧＦ乳酸菌对小鼠ＵＣ具有良好的预防和治疗效果，将为ＵＣ治疗制剂的开发提供更加广阔的思路。 　　关键词：乳酸菌；人酸性成纤维细胞生长因子；溃疡性结肠炎 　　中图分类号：Ｑ８１５文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2508-03 　　 　　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｉｄｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ 　　Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ 　　 　　ＴＯＮＧ Ｌｅｉａ，ＺＨＡＮＧ Ｑｉ－ｈａｏａ，ｂ，ＱＩＵ Ｚｈｕａｎｇ－ｗｅｉａ，ＳＵ Ｚｈｉ－ｊｉａｎａ，ｂ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇ－ｘｉａａ，ＨＵＡＮＧ Ｙａ－ｄｏｎｇａ，ｂ 　　（ａ． Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｂ． Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａ??ｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｊｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３２， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｖｅｃｔｏｒ ｐＧＭＮ４ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ａＦＧＦ） ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｖｅｃｔｏｒ ｐＧＭＮ４ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｉｎｔｏ Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａＦＧＦ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｏｄｉｕｍ ｓｕｌｐｈａｔｅ （ＤＳＳ）． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｂｙ ｓｔｏｍａｃｈ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ??ｉｔｈ Uｌｃｅｒａｔｉｖｅ Cｏｌｉｔｉｓ（ＵＣ） ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｆｏｒ １７ ｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ． Ｓｏｍｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ， ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ， ｓｔｏｏｌ， ｃｏｌｏｎ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ＭＰＯ） ｉｎ ｕｌｃｅｒａｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａＦＧＦ ｉｎ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ５０ μｇ／ｍＬ； ｈｉｇｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ， ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ， ｓｔｏｏｌ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ， ｋｅｅｐ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ｃｏｌｏｎ， ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＭＰＯ． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃ