il24联合顺铂抑制宫颈癌裸鼠移植瘤生长的初步研究-preliminary study on il24 combined with cisplatin inhibiting the growth of cervical cancer xenografts in nude mice.docx

学位论文独创性声明本人郝燕霞声明，所呈交的学位论文系在导师李莉教授指导下本人独立完成的研究成 果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开 道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位 仍然为山西医科大学。(必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用）前言宫颈癌(cervical cancer,CC)是危害妇女健康的恶性肿瘤之一，它的发病率和病死率在 女性恶性肿瘤中均居于第二位,而且有年轻化趋势。全世界每年有近 50 万新发病例,其中 超过半数将因此而死亡[1]。手术或(和) 放疗是治疗宫颈癌最常用的手段,介入化疗也是一 种有效的辅助疗法。近年来,基于顺铂的新辅助化疗[2 ]和同步放化疗等综合治疗成为治疗 宫颈癌的新趋势,后者已经成为中晚期宫颈癌的标准化治疗措施 [3] 。化疗在宫颈癌治疗中 地位已经确定, 但如果长期大量的应用，药物会对机体产生引起严重的副反应，而且还能 使肿瘤细胞产生耐药反应。由此，人们进一步寻求并研究减轻化疗药物的毒性并增加治 疗效果的优化方案。随着医学分子生物学理论和技术的发展以及对宫颈癌发病机制认识的不断深入研 究，尤其是 DNA 重组技术和基因转移技术逐步成熟，越来越多的研究者们提出了基因治 疗。基因治疗是指通过基因转移的方法达到基因替代、修正或基因增强的目的。理想的 功能基因应是其表达能诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长和肿瘤血管形成,而又对正 常细胞和组织无明显毒副作用。基因治疗与手术、化疗、放疗等常规疗法相比，在控制 宫颈癌细胞的增殖、预防和延缓癌症复发、转移，以及提高宫颈癌患者生活质量等方面 具有独特优势。有研究显示，IL-24是目前已知的唯一既能抑制肿瘤生长又能刺激免疫应答发挥抗肿瘤 作用的细胞型抑癌基因。它有多种抗肿瘤作用，如选择性诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞 无影响、抗血管生成、阻滞细胞周期的进行、抑制肿瘤的侵袭和转移、促进免疫系统的激活及免疫调节的作用等。大量的实验证明IL-24有抑制肿瘤的作用且对正常组织和细胞无明显毒副反应。目前IL-24对实体瘤治疗已经完成临床Ⅰ期实验，Ⅱ期临床试验已在进行中, IL-24为肿瘤患者带来希望。然而，对于IL-24杀伤肿瘤细胞及抑制瘤细胞生长的机制和免 疫调节目前尚未研究完全。宫颈癌基因治疗尚处于临床前基础研究阶段，初步研究结果显示了潜在的前景，但 目前可查资料尚没有一种成熟疗法可代替常规治疗。传统的常规化学药物治疗和新型的 基因治疗相结合为临床治疗宫颈癌提供了一种新的思路。本实验采用临床上效果较肯定的化疗药物顺铂，联合 IL-24 对宫颈癌裸鼠移植瘤进 行干预，分别观察两者单独和联合用药的治疗效果，并初步探讨产生此作用后一些基因 表达调控机制，同时比较基因和/或化疗药物治疗宫颈癌的效果。1.材料1. 1 标本来源第一章 材料和方法质粒、细胞 含有目的基因 IL-24 片断的穿梭质粒 pDC316-hIL-24 由北京本元正阳 基因技术有限公司合成，人宫颈癌 HeLa 细胞株购自北京协和医科大学细胞中心。SPF 级 雌性(BALB/c)裸小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司。1. 2 试剂DMEM 高糖完全培养基GIBCO 公司胎牛血清GIBCO 公司0.25%胰蛋白酶Sigma 公司DMSO(二甲基亚矾)Sigma 公司大肠杆菌 E.eoli.DH5a日本 TaKaRa 公司 无内毒素质粒抽提试剂盒北京索莱宝科技有限公司 Lipofectamine2000Invitrogen 公司免疫组化试剂盒北京中杉金桥生物工程公司10%中性甲醛液山西医科大学第一医院病理科胰蛋白陈、酵母抽提物sigma 公司氨苄青霉素哈尔滨制药厂1. 3 所用仪器CO2 细胞培养箱Ashev