hpi4对人上皮性卵巢癌a2780细胞增殖和凋亡的影响-effects of hpi _ 4 on proliferation and apoptosis of human epithelial ovarian cancer a2780 cells.docx

原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者日期年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和节阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者日期年月日HPI-4对人上皮性卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响研究生秦晓洋导师王武亮教授郑州大学第二附属医院妇产科河南郑州450014摘要背景与目的卵巢癌致死率位居于女性生殖系统恶性肿瘤的第一位。其起病比较隐匿，缺乏相对特异性的临床症状、迅速实时和卓有成效的诊断手段和治疗方案。因此，它在被明确诊断时多已为晚期且往往预后不良。卵巢恶性肿瘤目前以手术为主要治疗方式。虽然辅以化学药物治疗、放射治疗及传统的中医药等，但最终的治疗效果往往并不十分理想。目前肿瘤相关的研究已逐步深入到了细胞、分子水平。卵巢癌发生发展的研究也不例外。其中，关于细胞间众多信号通路与恶性肿瘤发生发展的研究也已成为近年来的热点。Hedgehog(Hh)信号通路，第一次是在对果蝇进行研究时发现的。我们是在对其胚胎体节发育调节的探索中认识了Hh信号通路。后来又在脊椎动物中证实存在并成功分离出了其中重要的相关基因。Hh信号通路，作为体内非常具有典范性的信号通道之一，不但与胚胎的发生发育有关联，还与组织更新有着极为密切的联系。它还在人类所熟知的多种恶性肿瘤的发生、发展中起了巨大作用。截止到目前相关研究表明：Hh信号通路，在宫颈癌、子宫内膜癌等中的影响及作用机制已有了一些较为深入的研究。当然，卵巢癌也不例外。人卵巢癌组织中也已经被发现：其内存在有明显的该通道的异常活化、相关蛋白的高表达。一些报道提出：Hh信号通路的异常激活在卵巢癌的发生、发展中起着重要的作I用。抑制该通路可导致卵巢癌的细胞生长抑制及癌细胞的凋亡。这也得到相关的研究的证实。因此，Hh信号通路的抑制剂可能是卵巢癌有效的治疗途径之一。GLI蛋白，其作为Hh通路的下游成员而被大家熟知。它不仅仅介导了多数的Hh信号通路，并且还在多种比较常见的肿瘤，如乳腺癌，胶质瘤等，都有异常的活化及增殖。已经被发现的并研究的Hh信号通道下游的小分子抑制剂有GANT61、GANT58和HPI系列等。它们均为通过抑制一个特殊的位点―GLI蛋白，来抑制恶性肿瘤细胞的生长。关于Hh信号通路在卵巢癌中的作用，目前研究多集中在上游位点。但是关于GLI诱导因子介导的该通道的下游位点相关研究及报道较少。有研究称，HPI-4，作为一个下游小分子抑制剂，可能是通过抑制Hh通路的下游而发挥作用的。HPI-4抑制肿瘤细胞生长的机制可能是：抑制了该通路中初始纤毛细胞（具有感受器功能）。然而目前关于HPI-4在人上皮性卵巢癌中的研究国内外报道比较少，其具体的作用机制目前仍不十分明晰。几乎所有的肿瘤细胞中都可以见到细胞周期调节的紊乱及失调控的现象。所以说，肿瘤就是一种细胞周期失去调节的特殊疾病。细胞周期蛋白D1(CyclinD1)，是特别重要的核内调节蛋白之一，其存在于细胞周期中。它的过度表达可导致G1/S检测点G1/S的缺陷，并且在G1期间隔变短的情况下使细胞顺利越过G1/S限制点。在这种情况下细胞的抗增殖功能就消失了，最终变为我们所知道的异常细胞。这些不受细胞周期调控的异常细胞，出现增殖、不断累积，最终会引起癌变。因此，CyclinD1蛋白，异常表达于细胞周期失控中，进一步发展成为细胞异常增殖。其在导致癌变的发生过程中发挥着重要作用。本研究拟观察HPI-4对A2780细胞增殖、凋亡的影响，及其对CyclinD1、GLI1蛋白表达的影响。以进一步探讨：Hh信号通路，参与卵巢癌发生发展可能的机制。本研究不仅给临床卵巢癌的靶向治疗提供了一个新的靶向药物选择，也为小分子抑制剂HPI-4在卵巢癌中的进一步研究夯实了可靠的理论基础。材料与方法复苏和培养人上皮性卵巢癌A2780细胞，至对数生长期。首先用MTT法分别检测不同浓度、不同时间下Hh信号通路抑制剂HPI-4作用下A2780细胞的抑制率。然后通过流式细胞仪测定不同浓度下HPI-4对人上皮性卵巢癌A2780细胞作用48小时后对细胞周期分布及凋亡的影响。最后采用免疫