hlab27拮抗肽真核表达载体的构建 表达及其生物学活性的初步分析-construction and expression of hlab 27 antagonist peptide eukaryotic expression vector and preliminary analysis of its biological activity.docx

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩略语索引 缩略语 英文全称 中文全称 AS AP ankylosing spondylitis antagonist peptide 强直性脊柱炎 拮抗肽 β2m bp β2-microglobulin base pair β2-微球蛋白 碱基对 Cos7 CHO African-green-monkey kidney cell Chinese hamster ovary 非洲绿猴肾成纤维细胞 中国仓鼠卵巢细胞 cDNA DMSO complementary DNA dimethyl sulfoxide 互补 DNA 二甲基亚砜 DNA dNTP deoxyribonucleic acid deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核苷三磷酸 EDTA ELISA ethylene diaminetetraacidic acid enzyme-linked immunosorbent assay 乙二胺四乙酸 酶联免疫吸附测定 EGFP FACS enhanced green fluorescent protein Fluorescence-activated cell storing 增强型绿色荧光蛋白 荧光细胞分类术 FCM HLA flow cytometry human leucocyte antigen 流式细胞仪 人类白细胞抗原 Ig IPTG Immunoglobulin isopropylthiob-D-galactoside 免疫球蛋白 异丙基硫代-D-半乳糖苷 Kb Kilobase 千碱基 kD Kilodalton 千道儿顿 MHC major histocompatibility complex 主要组织相容性复合体 ORF open reading frame 开放读框 PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 Rpm round per minute 每分钟转数 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 RT-PCR reverse transcription-polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链式反应 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SDS SDS-polyacrylmide gel electrophoresis SDS 聚丙烯酰胺凝胶电 泳 ssDNA single-stranded DNA 单链 DNA TBS Tris-buffered saline Tris 缓冲盐溶液 Tris Tris(hydroxymethyl)aminome-thane 三（羟甲基）氨基甲烷 WB WesternBloot 蛋白质印迹法 HLA-B27 拮抗肽真核表达载体的构建、表达及其生物 学活性的初步研究 摘 要 强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis，AS)是一种严重危害人类身体健康 和生存质量，并严重影响劳动力的慢性全身性自身免疫性疾病，其起病隐匿，病 程长，最终导致患者丧失活动能力，甚至致残。迄今 AS 的病因尚不不清楚，其 发病机制并不明确，目前无任何特异性治疗方法，因此有关 AS 治疗策略的探索 始终是国内外研究尤为关注的焦点、热点和难点。目前所使用药物与方案仍以非 特异性缓解对症疗法为主，这会产生多种多样的毒副作用。因此，如何研创出高 效、低毒、特异的新型药物，使其既能迅速缓解 AS 的症状，又能地选择性有效 阻断 AS 的病理过程已成为风湿免疫学领域亟待解决的关键问题！ 从理论上讲，任何能够有效减少、抑制或阻断 AS 病理生理发生与发展进程 的药物都能有效减轻或缓解 AS 的骨关节病变。鉴于 HLA-B27 是 AS 发生发展的免 疫过程的中心环节，选择性阻断 HLA-B27 信号途径就成为有效治疗 AS 自身免疫 性疾病的重要策略之一。所以本课题拟将免疫阻断与基因治疗性疫苗两大策略进 行有机结合，创新性研制出基于阻断 HLA-B27 信号途径的全新治疗性基因疫苗。 本研究在前期工作中采用 HLA-B*2704 及 HLA-B*2705 重链胞外区蛋白筛选噬菌 体 12 肽随机肽库并获得了能与其特异性结合的拮抗肽（antagonist peptide， AP）。 本研究的主要目的是对筛选得到的 AS 治疗性疫苗：HLA-B*2705 -AP 进行真 核表达载体的构建、体外表达鉴定，并对其生物学活性进行初步研究。本研究首 先