cuedc2在热休克反应以及内质网应激反应中的功能及机制分析word格式论文.docx

及机制研究34前言34材料与方法381.材料及来源381.1菌株和质粒381.2主要试剂和抗体382.实验方法382.1细胞培养和转染382.2RNA干涉实验382.3免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）382.4免疫荧光实验39结果401.CUEDC2 对于不同应激反应诱导JNK激活的影响401.1CUEDC2 对Tg 诱导的JNK激活的影响401.2CUEDC2 对于高渗透压激活JNK通路的影响411.3CUEDC2 对DTT 诱导的JNK通路的影响411.4不同干涉序列干涉CUEDC2 对Tg激活的JNK的影响422.CUEDC2 与ASK1 存在可诱导的相互作用432.1CUEDC2 与ASK1 存在相互作用432.2CUEDC2 与ASK1 共定位研究432.3内质网应激对CUEDC2 与ASK1 相互作用的影响443．确定CUEDC2 与ASK1 之间的相互作用区域45讨论48结论51参考文献52文献综述61发表的文章(一)…..………………………………………………………………………75 发表的文章(二)………………………………………………………………………………84 个人简历…………………………………………………………………………………93 致谢……...………….………………………………………………………………… 95缩略词表英文缩写ATCC英文全名American type culture collection中文译名美国典型培养物保藏所bpbase pair碱基对CUECouplingofUbiquitin to ERdegradationDMEMDulbecco’smodified Eagle’smedium改进的Eagle 培养基HSP70Heat-shock protein 70热休克蛋白70HSC70Heat shock cognate protein 70热休克同源蛋白70NP-40NonidetP-40一种非离子型去污剂EDTAethylene diamine tetraacetic acid乙二胺四乙酸FCSfetalcalf serum胎牛血清G418geneticin新霉素HAhemagglutinin红血球凝聚素DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜DTTdithiothreitol二硫苏糖醇ECLenhanced chemi-luminescence增强的化学发光显色IBimmunoblot免疫印迹IPimmunoprecipitation免疫沉淀HSheat shock热激ERstressHSF1endoplasmicreticulumstressHeat-shock factor1内质网应激反应热休克转录因子1ASK1Apoptosis signal-regulatingkinase 1凋亡信号调节激酶1PAGEPolyacrylamide gelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSphosphatebuffered saline磷酸盐缓冲液PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应SDSsodiumdodecyl sulphate十二烷基磺酸钠siRNASmallhairpin RNA小发卡RNAWBWestern blot蛋白质印迹WCL HS(R) UN KD GSTE.coliwhole celllysateHeat shock(recovery) untreatedKinase domain glutathione S-transferaseEscherichia.Coli全细胞裂解液热激后恢复未处理的激酶结构域谷氨酸转移酶大肠杆菌CHXTg DAPIrpm PMSFHSPscycloheximide thapsigargin4,6-diamino-2-phenyl indole revolution per minute PhenylmethanesulfonylfluorideHeat shock proteins放线菌酮毒胡萝卜素4,6-二氨基－2－苯基吲哚每分钟转速苯甲基磺酰氟热休克蛋白质CUEDC2在热休克反应以及内质网应激反应中的功能及机制研究摘要本项工作主要研究CUEdomaincontaining2（CUEDC2）蛋白质在热休克反应以及内质网应激反应中发挥的作用，发现CUEDC2蛋白质参与到上述两条通路中，发挥了重要的的功能。CUEDC2是一个含有CUE结构域的基因，对它的功能研究比较少。CUE结构域为一个大约含有40个氨基酸的序列，存在于许多的真核细胞蛋白质中，如Tollip、TAB2、TAB3、VPS9 等。含有CUE 结构域的蛋白质广泛参与细胞内的信号转导，发挥重要