cuedc2在紫外线诱导细胞凋亡中的作用分析及cuedc2转基因小鼠的研制word格式论文.docxVIP

综述62发表文章69个人简历73致谢74缩略词表英文缩写ATCC英文全名Americantypeculturecollection中文译名美国典型培养物保藏所bpCaspase3basepair碱基对半胱天冬蛋白酶3CUECouplingofUbiquitintoERdegradation结合泛素到内质网降解DAPI4,6-diamino-2-phenylindole4,6-二氨基－2－苯基吲哚DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜DTTdithiothreitol二硫苏糖醇ECLenhancedchemi-luminescence增强的化学发光显色E.coliEscherichia.Coli大肠杆菌EDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸ERKextracellularsignal-regulatedkinases细胞外信号调节激酶FCSfetalcalfserum胎牛血清G418geneticin新霉素GFPGreenfluorescentprotein绿色荧光蛋白质hhour小时IBimmunoblot免疫印迹IPimmunoprecipitation免疫沉淀JNKc-JunN-terminalkinasesc-Jun 末端激酶Kkeratin角蛋白K1keratin1角蛋白1KDkilodalton千道尔顿MAPKsmitogen-activatedproteinkinases丝裂原活化蛋白激酶minminute分钟MTmitochondrion线粒体NP-40NonidetP-40一种非离子型去污剂OPA1opticatrophy1视神经萎缩分子1P38 PAGE PBS PCDPCRp38mitogenactivatedproteinkinasePolyacrylamidegelelectrophoresisphosphatebufferedsalineprogrammedcelldeathpolymerasechainreactionP38 有丝分裂原激酶聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液程序性细胞死亡聚合酶链式反应PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟Rpmrevolutionperminute每分钟转速shRNAshorthairpinRNA短发卡RNAsiRNAsmallinterferingRNA小干涉RNASDSTGsodiumdodecylsulphatetransgene十二烷基磺酸钠转基因TNFTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子UVultraviolet紫外线WBWesternblot蛋白质印迹WTwildtype野生型CUEDC2 在紫外线诱导细胞凋亡中的作用研究及Cuedc2转基因小鼠的研制摘要CUEDC2(CUEdomaincontaining2)是含有一个CUE结构域的保守蛋白质。CUE结构域是一个大约含有40 个氨基酸的保守序列，能够识别细胞内的单泛素和多泛素。目前，对CUEDC2 的功能研究较少，实验室以前的工作发现CUEDC2能够结合孕激素受体(PR)并且促进孕激素依赖的PR泛素化降解。另外，CUEDC2 作为一个接头蛋白质通过招募蛋白质磷酸酶PP1使IKK脱磷酸失去活性，从而抑制NF-κB信号通路。本项工作主要研究CUEDC2在UV(ultraviolet，紫外线)诱导细胞凋亡中的作用及Cuedc2 转基因小鼠的研制。一、CUEDC2 在紫外线诱导细胞凋亡中的作用研究细胞凋亡是多细胞生物生命过程中重要的生理或病理现象。多细胞生物的发育及生存依赖于其细胞增殖、分化和凋亡之间的平衡，一旦这种平衡被打破，就会发生胚胎发育异常、退行性疾病以及癌症等。UV照射被认为是导致皮肤癌的最主要的环境因素。细胞凋亡、细胞周期阻滞和DNA突变是UV照射细胞最重要的效应，三个效应之间相互关联，相互影响。UV诱导细胞凋亡机制的研究有助于理解皮肤癌的发生和抗肿瘤药物的研究。为了确定CUEDC2 是否影响UV 诱导细胞凋亡，我们分别在HACAT细胞株，Hela细胞株和U2OS 细胞株中稳定或者瞬时干涉CUEDC2，发现干涉CUEDC2明显促进UV诱导的细胞死亡。在干涉CUEDC2的细胞，通过检测Caspase3的剪切以及流式细胞术的检测，均发现干涉CUEDC2的细胞对UV诱导的细胞凋亡敏感性增加，说明CUEDC2抑制UV诱导的细胞凋亡。MAPKs通路中的JNK激活对UV诱导细胞凋亡是必须的，我们检测了CUEDC2对UV诱导促凋亡的MAPKs 信号的影响，结果证明CUEDC2没有影响UV诱导的JNK和P38磷酸化。同时CUEDC2没有影响促存活的信号通路ERK和AKT的激活。P53蛋白质通过控制重要的凋亡基因