cugbp1在人星形细胞瘤中的表达及其敲减后对u251细胞的影响机制分析word格式论文.docx

第二军 第二军医大学博士学位论文 CUGBP CUGBP1 在人星形细胞瘤中的表达及其敲减后对 U251 细胞的影响机制研究 - - PAGE 4 - - - PAGE 5 - 病毒转染人胶质瘤细胞进行细胞凋亡检测，显示 CUGBP1-shRNA 转染胶质瘤细胞的 细胞凋亡比例与对照组比较有明显的增加，达 73.8%，提示 CUGBP1 基因敲减使胶质 瘤细胞株的细胞(早期)凋亡明显增加，表明该基因有抑制胶质瘤细胞凋亡的作用。 5、细胞周期及细胞凋亡相关基因表达 以管家基因 GAPDH 作为内参，采用实时定量 RT-PCR 方法对 CUGBP1-shRNA 慢病毒感染胶质瘤细胞的 BCL2 mRNA 的表达进行检测，同时以 Scr-shRNA 慢病毒感 染细胞作为阴性对照，结果显示 CUGBP1-shRNA 组胶质瘤细胞 BCL2 mRNA 的表达量 较阴性对照组显著降低。提示 CUGBP 1 基因敲减下调了 BCL2 基因的表达，因而 CUGBP1 基因具有上调 BCL2 的表达进而抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞生长的作用。 以管家基因 GAPDH 作为内参，采用 Real-time 定量 RT-PCR 的方法对 CUGBP1-shRNA 慢病毒 感染胶质瘤细胞 CDKN1A mRNA 的表达进行 检测，同时以 Scr-shRNA 慢病毒感染细胞作为阴性对照，结果显示 CUGBP1-shRNA 组胶质瘤细胞 CDKN1A mRNA 的表达量较阴性对照组显著升高，提示 CUGBP1 基因敲减上调了 CDKN1A 基因的表达，因而 CUGBP1 基因具有下调 CDKN1A 基因的表达进而解除其对细胞周期 的抑制，促进肿瘤细胞生长的作用。 以 管 家 基 因 GAPDH 作 为 内 参 ， 采 用 Real-time 定 量 RT-PCR 方 法 对 CUGBP1-shRNA 慢病毒感染胶质瘤细胞 PCNA mRNA 的表达进行检测，同时以 Scr-shRNA 慢病毒感染细胞作为阴性对照，结果显示 CUGBP1-shRNA 组胶质瘤细胞的 PCNA mRNA 表达量较阴性对照组显著降低，提示 CUGBP1 基因敲减下调了 PCNA 基因的表达，因 而 CUGBP1 基因具有上调 PCNA 基因表达进而促进 DNA 合成、促进胶质瘤细胞生长的 作用。 以 管 家 基 因 GAPDH 作 为 内 参 ， 采 用 Real-time 定 量 RT-PCR 方 法 对 CUGBP1-shRNA 慢病毒 感染胶质瘤细胞 MCM2-7 mRNA 的表达进行 检测，同时以 Scr-shRNA 慢病毒感染细胞作为阴性对照，结果显示 CUGBP1-shRNA 组胶质瘤细胞的 MCM2-7 mRNA 的表达量除 MCM6-7 轻度降低外，其它均较阴性对照组显著降低，提示 CUGBP1 基因敲减下调了 MCM2-7 基因的表达，因而 CUGBP1 基因具有上调 MCM2-5 基 因表达进而促进细胞 DNA 合成、促进胶质瘤细胞生长的作用。 结论： 1、本研究首次发现 CUGBP1 在不同胶质瘤细胞株细胞及人胶质瘤组织中高表达， 而且其表达有随胶质瘤病理分级的增加而增加的趋势。 2、CUGBP1-shRNA 慢病毒能够高效转染恶性胶质瘤细胞株 U251 细胞并稳定敲减 其 CUGBP1 基因表达。 3、CUGBP1 基因敲减能够抑制恶性胶质瘤 U251 细胞增殖及 DNA 合成功能，因而 抑制 U251 细胞的生长。 4、CUGBP1 基因敲减能够引起恶性胶质瘤 U251 细胞 S 期阻滞，抑制细胞周期进 程；CUGBP1 基因敲减还能够诱导 U251 细胞(早期)凋亡。 5、CUGBP1 基因敲减能够下调细胞凋亡抑制基因 BCL2 表达，上调细胞周期抑制 基因 CDKN1A 表达，还能够下调 DNA 合成相关基因 PCNA 及 MCM2-7 表达。 以上结论提示 CUGBP1 敲减可能通过抑制细胞增殖及 DNA 合成、抑制细胞周期 进程及诱导细胞凋亡而抑制胶质瘤的发生和发展；这间接证明 CUGBP1 具有促进细 胞增殖及 DNA 合成，促进细胞周期进程及抑制细胞凋亡，进而促进胶质瘤发生发展 的癌基因样作用。CUGBP1 可以作为恶性胶质瘤的预测指标之一并可作为恶性胶质瘤 基因治疗的潜在分子靶点。 关键词：胶质瘤，CUG 结合蛋白 1，小发卡 RNA,增殖，凋亡，细胞周期，实时 定量 RT-PCR Abstract Recently, the mechanisms of tumorigenesis have been the focus of scholars at home and abroad, and it has been given incre