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.原创性声明本人郑重声明:所单交的学位论文,是本人在导师的指导下,独守.进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,牛;论文不包含任例其他个人成集体U经发表成撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要搅献的个人和集体,均口在文巾以明确方式标明。本声明的法伸责任由本人J1(损。期nH靴仰者1才雨吗年月n川川川4E刷刷刷刷唰41川川川AU唰删唰A『削川出d m川o川o.m叩川41阳Y学位论文使用授权声明本人在悖师指导F完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州火学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门成机构i送交论文的复印件和电子版,允许论文被商阅和{苦闷:本人授权郑州大学可以将木学位论文的今部或部分编入街关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和江编本学位论文。本人高校后发表、使用学位论文戒与该学位论文直接相关的学术论文成成果时,第一署名申位仍然为郑州火学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。4叫JJ瞅川气川。者作文论位学日期:年月日摘要恪(Chromium,Cr)主要用于工业生产涂料,染料,袖播:镀锚,皮革睐船队及木材贮存等。研究显示工人长期接触Cr(VI)可诱发肺癌.有研究表明,在活体细胞内90%的抗坏血酸(邸co巾ate,Asc)参与Cr(VI)的还原代谢,且Asc是Cr(VI)的主要还原剂。在体外实验巾Asc含量非常低,脱氢抗坏血酸(dehydroascrobate acid,DHA) 孵宵使细胞内Asc达到成接近机体的正常生础浓度。Reynolds等发现在对H460和IMR90细胞孵宵DHA90min后,再用Cr(VI)染毒细胞,细胞急性毒性隅强。Takahashi 等研究认为hMLHl和hMSH2基因在恪酸盐接触者肺癌患者的失活率高于非格酸盐接触者肺癌患者的失活率。目的:探讨DHA在Cr(VI)致细胞损伤中的作用,为进一步研究C叫VI)致癌及预防提供理论依据。方法$1.孵商用DHA浓度为0.6mmol/L的记血清培养液。DHA先溶fOMSQ,OMSO在无血清培养液中的体积分数为0.2%0Cr(VI)染寄放由建恪酸仰配制。实验分组为阴性组、溶剂细、脸组A和实验组Bo阴性组为空白对照组,溶剂组为仪DHA溶液孵商90min未有Cr(VI)处理组,实验组A为单独Cr(VI)处理组,实验组B为DHA孵宵90min后Cr(VI)处理细。2. DHA孵育后对A549细胞牛长曲钱的影响。实验分组为阴性组、溶剂组、实验组A和实验组B,共观察6d.Cr(VI)染毒浓度为10flmo盯d 处理时间为3亿3. DHA孵商后对A549细胞增娟的影响。Cr(VI)以0.00、12.5、2.50、5.∞μmoVL染毒A549细胞24h,分析实验组A、B的细胞增殖的影响。4.DHA孵育后对hMLHl,hMSH2,p53 表达的影响。以Cr(VI)0.00、125.、2.50、5.00μmoVL 染毒A549 细胞24h,提取总刚A,进行逆转录后进行实时荧光定最PCR (realtimePCR) 分析,检测灿fLHl、协,fSH2,p53mRNA的表达水平。Westernblot方以检测Cr(VI)作用24h后hMSH2在蛋白水平上的表达情况。摘要使用Bioimaging System成像分析系统扫而,GeneTool软件分析蛋白表站情况。6.运用SPSS12.0统计软件,Kolmogorov-SmirnoviE态件检验、Levene方禁齐性检验、t检验和单因素方辈分析对数掘进行统计分析:采用Pearson柑关进行相关性分析(检峨水准α就0.05) 。结果$1.阴性组和溶剂组A549细胞生长状况良好,在第4d达到生长商悔,随后出现增殖抑制现象:实验组A、日中A549细胞增殖被六价锵抑制,与阴性细比较,有统计学意义(P0.05);实验细A、B比较,实验细B巾A549细胞增殖抑制程度更强,有统计学意义(P0.05)。2. 实验组A、日的抑制率有差别,有统计学意义(P0.05); 实翰细A、B的ICso分别为:13.04Jlmo]/L和3.34阳no]/L,工者的急性毒性之比约为1:403.实验组日基因mRNA相对表达量低于实验组A,有统计学意义(P0.05) 。4. 实脆组BhMSH2蛋白相对表达最低于实斡细A,有统计学意义(P0.05);在实验组B中,随染毒剂量增加hMSH地向表达降低:实验组A 中刷SH2蛋白的表达在Cr(VI)浓度为1.25Jlmo]/L时较0.00Jlmo1lL时升荫,布统计学意义(P0.05),在2.50_5.00Jlmo矶时,随染毒刺量增加,蛋白表达降低,与0.00μmo1lL比较,有统计学意义(P0.05)。结论z1.DHA在Cr(旧)致细胞毒性中起到了促进

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