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Abl 通过磷酸化STAT1 调控IFNγ应答途径目录目录缩略词表1摘要33 本课题研究的立题依据和拟解决的科学问题13材料与方法151 细胞株、菌株、病毒株和质粒152 分子生物学试剂153 质粒构建、引物合成及序列测定154 细胞培养、冻存及转染175GST-STAT1 和His-STAT1 融合蛋白的原核表达及纯化186 免疫沉淀和免疫印迹19GST-Pulldown试验20FarWestern试验209 体外激酶分析2010 细胞裂解上清中蛋白质平衡2011荧光素酶活性检测2012 树突细胞抗原提呈试验2113 细胞免疫荧光试验2114 真核细胞总RNA 提取、逆转录合成cDNA及荧光定量PCR2215Duo-Link 试验2416 病毒培养及感染24结果27 1 荧光定量PCR验证转录组数据272c-Abl 调控Lmp2 和Tap1 基因转录272.1c-Abl 调控Lmp2 和Tap1基因mRNA表达水平282.2c-Abl 调控Lmp2基因启动子转录活性283c-Abl 与STAT1 相互作用29Ic-Abl 通过磷酸化STAT1 调控IFNγ应答途径目录3.1c-Abl与STAT1在细胞内形成免疫复合物293.2c-Abl与STAT1直接结合303.3c-Abl通过SH2结构域与STAT1C端结合323.4c-Abl与STAT1在细胞内相互作用，并且受IFNγ调控334c-Abl磷酸化STAT1 354.1c-Abl调控STAT1关键位点的磷酸化35c-Abl和Arg磷酸化STAT1 36c-Abl磷酸化STAT1Tyr701 37c-Abl磷酸化STAT1不依赖于JAK激酶385c-Abl促进STAT1蛋白表达426c-Abl调控STAT1活性426.1c-Abl促进STAT1同源二聚体形成426.2c-Abl促进STAT1进入细胞核436.3c-Abl/Arg调控STAT1转录激活活性467c-Abl调控小鼠树突细胞JawsIIMHC-I类抗原提呈能力488c-Abl调控IFNγ抗病毒生物学活性及病毒增殖能力498.1c-Abl调控IFNγ诱导细胞抗水疱口炎性病毒VSV感染活性498.2c-Abl调控新城疫病毒NDV-GFP在A549 细胞的增殖能力50讨论531非受体酪氨酸激酶c-Abl参与机体免疫反应532c-Abl对IFNγ信号转导调控机制的研究543c-Abl磷酸化STAT1 554细胞原位检测c-Abl与STAT1 相互作用565针对c-Abl通过磷酸化STAT1调控IFNγ信号转导其他问题的思考56结论59参考文献61附录67文献综述69发表文章79个人简历87致谢89II缩略词表英文缩写Ad英文全称Adenovirus中文全称腺病毒APCAntigen-presentingcell抗原提呈细胞ArgAblrelatedgeneproductAbl 相关蛋白c-AblCellular-Abelsongeneproductc-Abl蛋白Co-IPCo-Immunoprecipitation免疫共沉淀CTLCytotoxiclymphocyte细胞毒性T淋巴细胞DAPI4,6-diamidino-2-phenylindole4,6-二脒基-2-苯基吲哚DKOc-Abl/ArgdoubleknockoutMEFsc-Abl/Arg双敲除MEF细胞GASGammaActivatedSequence伽马激活序列GFPGreenfluorescentprotein绿色荧光蛋白GSTGlutathioneS-transferase谷胱甘肽S转移酶IBImmunoblot免疫印迹IFNGR1/2Interferongammareceptor1/2γ干扰素受体1/2IFNγInterferongammaγ干扰素Ip1010kDaIFN-γ-inducedproteinγ干扰素诱导10kDa蛋白IRF1Isg15Interferonregulatoryfactor1Interferonstimulatedgene15干扰素调节因子1干扰素刺激基因15Jak1/2Lmp2/7Januskinases1/2Lowmolecularweightproteins2/7Janus酪氨酸激酶1/2低分子量蛋白2/7Mecl-1Multicatalyticendopeptidasecomplexsubunit1复合催化内肽酶样蛋白11MHC-I/IINDVMajorhistocompatibilitycomplexclassI/IINewcastleDiseaseVirus主要组织相容复合物I /II新城疫病毒OVAOvalbumin卵清蛋白PDGFRPlatelet-derivedgrowthfacto