cox2 shrna对大鼠肝星状细胞肾上腺素受体表达的影响word格式论文.docxVIP

英文缩写主要缩写语英文索引英文缩写英文缩写PBSphosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液PDGFplateletderivedgrowthfactor血小板衍生因子RNAiRNAinterferenceRNA干扰siRNASmallinterferingRNA小干扰RNATGF-βtransforminggrowthfactor-β转化生长因子-βCOX-2shRNA对大鼠肝星状细胞肾上腺素受体表达的影响中文摘要目的研究COX-2shRNA对大鼠肝星状细胞肾上腺素受体表达的影响。方法1应用已构建的带有荧光的三条不同COX-2shRNA片段的质粒，通过脂质体LiplofectamineTM 2000转染大鼠HSC，荧光显微镜下评估细胞的质粒转染效率。2分别在转染HSC后24h、48h、72h提取RNA，用RT-PCR法检测肝星状细胞中COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR的mRNA表达，同时筛选出三条COX-2shRNA序列中沉默效果最好的序列。3用沉默效果最好的COX-2shRNA片段转染肝星状细胞，免疫细胞化学法检测肝星状细胞中COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR的蛋白表达。4计量资料数据均以均数±标准差(x±S)表示，多组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，组内比较采用LSD-t检验,用SPSS17.0软件进行统计分析，P﹤0.05作为差异显著性标准。结果1COX-2shRNA三条序列转染HSC后的24h、48h、72h三个时间段，在荧光显微镜下观察到HSC内均有荧光表达，而空载组和空白对照组无荧光表达。2RT-PCR法证实HSC可表达COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-ARmRNA，三条片段的COX-2shRNA在转染HSC后均可不同程度的减少COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-ARmRNA的表达，其中以COX-2shRNA序列1组转染HSC后的72h作用最明显。3免疫细胞化学法证实HSC可以表达COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR蛋白,且COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR在HSC中的分布基本一致，主要分布于细胞膜，细胞浆也有少量表达，在COX-2shRNA序列1组转染HSC后的72h，COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR蛋白表达减弱最明显。结论HSC上可表达COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR。COX-2shRNA能够沉默大鼠HSC中COX-2、β1-AR、β2-AR、β3-AR的mRNA及其蛋白的表达，抑制COX-2可减少HSC上肾上腺素受体的表达。关键词：COX-2；shRNA；β1-AR；β2-AR；β3-AR；肝星状细胞；COX-2shRNAonrathepaticstellatecellexpressionofadrenergicreceptorAbstractObjectiveResearchtheexpressionofadrenalinereceptorsinHSCbythewayofCOX-2 shRNAinrat.MethodsApplicationhasbeenbuiltwiththreedifferentfluorescentfragmentsofCOX-2shRNAplasmid,liposomeLiplofectamineTM2000TransfectionofRatHSC,cellfluorescencemicroscopytoassesstheefficiencyofplasmidtransfection.HSCweretransfectedafter24h,48h,72hextractionofRNA,RT-PCRassayusinghepaticstellatecellsCOX-2,β1-AR,β2-AR,β3-ARmRNAexpression,whileselectedthebestsequenceofsilencebetweenthethreeofCOX-2shRNAsequence.SilencethebestresultswiththeCOX-2shRNAfragmentstransfectedhepaticstellatecells,detectedbyimmunocytochemistryofhepaticstellatecellsCOX-2,β1-AR, β2-AR, β3-ARprotein.Measurementinformationanddataaremean±standarddeviation(x±S),saidmanygroupswerecomparedbysinglefactoranalysisofvariance(one-wayANOVA