c5sirna对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用word格式论文.docxVIP

论文原创性声明则川11111111111111111111111111111111111111Y1840231本人郑重声明:所黑交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立址行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:矿ν日期:υ年IZ_月7日学位论文使用授权声明本人完全了解中山大学有关保留、使用学位论文的规定，即: 学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆、院系资料室被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其他方法保存学位论文。必威体育官网网址论文必威体育官网网址期满后适用本声明。魁祸学位论文作者签名:兮沂/日期:}如/饲7日C5-siRNA 对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用硕士研究生何志红硕士生导师吴索华摘要研究背景z心肌缺血再灌注(mycardialischemiaandreper玩lSion，MIIR)损伤是指心肌组织在恢复血液模流后发生的细胞死亡戒功能降低。在缺血再灌注过程中，大最补体被迅速激活，通过酶促反应产生大量活化补体片段。其早期产物在调理和免疫清除方丽起重要作用。而通过补体激活级联反应产生的终产物.攻膜复合物(C5b9) 沉积在心肌缺.ún.区，直接攻击心肌细胞，是导致细胞死亡的直接因素。因此，针对晚期补体激活产物C5 的治疗具有重要的意义，因其既可在口水平抑制补体级联反应阻止攻膜复合物形成和过敏毒素C饨的产生，又能维持其必要的免疫功能。目前，已经发现了许多补体抑制物，但其中极少投入临床应用中。刚A 干扰(RNAinterfere，RNAi) 是近年发展起来的研究转录后剪切的一种实验方法。它将目的基因所对应的双链RNA 导入生物体，导致相应的功能降解，从而使目的基因沉默。RNA干扰有潜力成为未来再效干预对抗MII民损伤的泊疗新方向。缺氧和缺眠在病理及发病机制上非常类似。在本实验中，我们采用肉体心肌细胞建立缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation，WR)损伤模型，模拟在体心肌缺血再灌注过程，利用RNA干扰技术，研究C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响。目的:本课题分为两部分，研究采用RNA技术，通过沉默C5补体激活产物的表达而抑制HfR心肌细胞补体的激洒，进而探讨其对心肌细胞缺氧嗣复氧损伤的影响。(1)研究C5-si刚A对乳鼠心肌细胞缺轧复氧损伤的保护作用。(2)探讨C5-si刚A 对乳鼠叩R 损伤心肌细胞。表达蠢的影响。方法z(1)将培养的原代单居心肌细胞随机分为4组:正常对照组(Control组)、缺氧复氧组(H/R组)、HIR+C5-siRNA组、HfR+空载体病毒组。其中后三组均经历2小时缺氧和4小时复氧，HfR+C5-siRNA组及HIR+空载体病毒组在缺氧前2小时分别给予C5-siRNA及空载体病毒。用CCK-8快遮比色法检测心肌细胞增殖情况(测OD值〉。(2)将培养的原代单层心肌细胞随机分为4 组:正常对照组(Control组〉、缺氧复氧组(H/R组〉、HIR+C5-siRNA 细、HIR+空载体病毒组。按方法(1)设计加入试剂后披上述条件培择。分别用RT-PCR法及Westem810t法从RNA基因水平及蛋白水平测定C5表达量。结果z(1)H/R+C5-siRNA组测定OD值显著高于HIR组及HfR+空载体病毒组(PO.05)o朋RT-PCR法及Westem810t法测定，HIR吨5-siRNA组C5表达最均显著低于HIR 组及HIR+空载体病毒组。结论z(1)CιsiRNA 对心肌细胞缺氧.复氧损伤具有保护作用。(2)C5-si刚A能降低缺氧，复氧损伤心肌细胞C5表达量，这可能与C5-siRNA 对心肌缺氧幡复氧损伤的保护作用有关。关键词:C5; 乳鼠:心肌细胞:缺氧翩复氧损伤; RNA干扰ProtectiveEffectofC5-siRNAonhypoxia/reoxygenation injuryinneonatal ratcardiomycytesName:HeZhihongSupervisior:WuSuhuaABSTRACTIntroductionComplementsystemisactiviatedbyallkindsofpathwaysinmycardialischemic/referfusioninducedi时ury.Theseactiviatedcomplementfragmentsplayimportantrolesinmycardiali