c57bl6小鼠cia模型建立方法的改进及cia小鼠脾淋巴细胞th1与th2的动态观察word格式论文.docxVIP

附表……………………………………………………………..………48讨论……………………………………………………………..………49 小结……………………………………………………………..………52 参考文献………………………………………………………..………53 结论……………………………………………………………..………54综 述……………………………………………………………..………55 致 谢……………………………………………………………..………62 个人简历……………………………………………………………..………63C57BL/6 小鼠 CIA 模型建立方法的改进及 CIA 小鼠脾淋巴 细胞 Th1 与 Th2 的动态观察摘要类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性、炎症性、 组织特异性自身免疫性疾病，发病机制非常复杂，至今尚未完全阐明。有 研究显示可能是由于自身性免疫障碍导致免疫系统持续攻击关节组织造 成长期慢性炎症。尽管已经证实多种细胞和分子参与了关节的炎症反应和 组织破坏，但抗原特异性 T 细胞的激活始终被认为是 RA 发生发展的中心 环节。T 细胞主要是通过细胞间的作用及其分泌的细胞因子在 RA 的发生 发展中发挥作用。CD4+T 细胞作为效应 T 细胞的重要成分，参与免疫应 答的各个阶段，在免疫调节中起关键作用，是细胞免疫的核心和枢纽。目 前较为公认的观点是：RA 是抗原呈递细胞和 CD4+T 细胞作用的结果。随 着近年对 CD4+T 细胞在 RA 中的作用研究不断深入，为深化对 RA 发病 机制的了解，拓展治疗 RA 新思路，寻找新的治疗靶点提供了新的理论与 实验依据。本研究在改进 CIA 小鼠模型的研究基础上，以胶原诱导性关节炎小 鼠(CIA)为研究对象，通过对 CIA 模型小鼠脾脏 CD4+T 细胞亚群 Th1 和 Th2 细胞在不同疾病发展时期占 CD4+T 细胞百分比的变化规律以及小鼠 血清中细胞因子 IFN-γ、TNF-α 动态观察，进一步阐明 CD4+T 细胞在 RA 疾病的发生发展中的作用，为揭示类风湿性关节炎的发病机制提供实验依 据。第一部分C57BL/6 小鼠 CIA 模型建立方法的改进 目的：建立稳定的 C57BL/6 小鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型，为进一步进行类风湿关节炎（RA）发病机制及治疗研究奠定基础。 方法：1．健康清洁级 C57BL/6 小鼠 100 只，随机取 20 只做正常对照组， 其余 80 只小鼠随机分为 4 组：常规方法组：CⅡ与 FCA 等比例混合物免 疫动物；卡介苗低剂量组、中剂量组和高剂量组，分别在 CⅡ与 FCA 等比例混合物中加上卡介苗 2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml 免疫动物。以各组小鼠 AI 评分判断模型是否成功。2．病理学观察：加强免疫 35 天脱颈处死小鼠，除去病变关节的皮毛 和多余的皮下组织，保留跖趾关节及趾间关节，4%多聚甲醛固定，10% EDTA 脱钙，常规脱水，石蜡包埋，切片。HE 染色，显微镜下观察。3．关节影像学观察：于加强免疫 49 天，钼靶 X 线机对小鼠踝、足 关节拍片，进行影像学检查和分析。4．脾脏的大体观察及脾指数测定:取处死后的小鼠脾脏进行大体观 察、称重,计算脾指数并与正常对照组进行比较。结果：1．各组小鼠造模成功率的比较及小鼠疾病发展过程中不同时间点关 节炎指数(AI)评分卡介苗低剂量组与中剂量组成模率高于常规方法组(P＜0.01)，但卡介 苗低剂量组与中剂量组成模率比较差别无统计学意义。小鼠加强免疫后3d 逐渐出现足趾部及踝关节皮肤发红，轻度肿胀等关节炎症状。以低剂 量组为例分别于加强免疫 3d，7d，10d，12d，14d，21d，28d，35d 检测 各组小鼠 AI 评分，CIA 模型组小鼠 AI 值在不同时间点与正常对照组相比均有显著性差异(P＜0.01) 。卡介苗高剂量组动物死亡率达到 80%，未作 统计。2．关节组织病理学研究与正常对照组相比，模型组小鼠（加强免疫 35d）病变关节骨质和软 骨组织破坏，滑膜组织增厚，血管新生增多，大量炎症细胞侵润。3．关节影像学检查 影像学检查显示病变关节组织畸形，关节间隙变窄，关节面不光滑，骨膜内有新骨形成。4．免疫后小鼠脾脏的变化加强免疫后 35d 小鼠脾脏体积增大，颜色发黑。脾指数与正常对照组 比较均显著增加(P＜0.01)。结论：1．在常规造模方法的基础上按照 2.5mg/ml 的剂量加入卡介苗可有效 增加 CIA 小鼠模型的成模率。低剂量组与中剂量组成模率比较差别无统计学意义。低剂量组 CIA 模型小鼠关节炎指数(AI)在加强免疫 3d，7d，10d，12d，14d，21d，28d，35d 各时间点均高于正常对