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2018-05-18 发布于上海
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原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日C3aRA、C5aRA对IgA1刺激的人肾小球系膜细胞增殖及IL-6、MCP-1表达的影响摘要研究目的本研究利用IgA1分子刺激人肾小球系膜细胞，观察补体C3a、C5a受体拮抗剂（C3aRA、C5aRA）对其增殖及炎症因子IL-6、MCP-1表达的影响，以进一步了解补体参与IgA 肾病的作用机制。研究方法1. 利用MTT 法检测IgA1 在不同浓度及孵育时间对人肾小球系膜细胞（HMCs）增殖的影响。将HMCs分为四组（空白对照组、IgA1组、IgA1+C3aRA组、IgA1+ C5aRA 组），MTT 法检测C3aRA、C5aRA对IgA1 刺激的HMCs 增殖的影响；荧光定量PCR（RT-qPCR）、Western blot检测各组细胞C3aR、C5aR mRNA及蛋白表达情况。3.将HMCs分为两大组：第一组（空白对照组、C3a组、IgA1+C3a组、IgA1+C3a+C3aRA组）和第二组（空白对照组、C5a组、IgA1+C5a组、IgA1+C5a+C5aRA组），RT-qPCR、Western blot 检测各组细胞IL-6、MCP-1mRNA 及蛋白表达情况。研究结果1. MTT 结果显示：不同浓度的IgA1 对HMCs 增殖作用的影响不同，10μg/mL-100mg/mL 的IgA1 均可以刺激HMCs 的增殖，其中以1mg/mL 和100μg/mL IgA1 对HMCs 增殖的刺激作用最强（P＜0.001）；100μg/mL IgA1刺I激HMCs 不同时间（6-48h）后其增殖均可出现增强，其中24h 时对HMCs 增殖的刺激作用最为明显（P＜0.001）。2. MTT结果显示：与对照组相比，IgA1 组细胞增殖明显增强（P＜0.001），而在分别给予C3aRA、C5aRA干预后，C3aRA组和C5aRA组细胞的生长增殖受到一定程度的抑制（P＜0.05）；RT-qPCR与Westernblot结果显示：IgA1 上调HMCs C3aR、C5aR mRNA 与蛋白表达（P＜0.001），而在分别给予C3aRA、C5aRA干预后，HMCs C3aR、C5aR mRNA 及蛋白表达明显减少（P＜0.05）。RT-qPCR 与Westernblot结果显示：IgA1、C3a、C5a可以刺激HMCsIL-6、MCP-1mRNA与蛋白的表达，但作用较弱（P＜0.05），IgA1 与C3a、C5a分别共同作用对HMCs IL-6、MCP-1 mRNA与蛋白表达的刺激作用较强（P＜0.05），C3aRA、C5aRA可以减弱IgA1 与C3a、C5a对HMCs IL-6、MCP-1 mRNA与蛋白表达的刺激作用（P＜0.05）。研究结论1.IgA1可刺激HMCs的增殖，且其增殖作用可被C3aRA、C5aRA部分阻断。2.IgA1 刺激HMCs 后可上调C3aR、C5aR的表达，C3aRA、C5aRA 可降低C3aR、C5aR的表达。3.C3a、C5a可分别与被IgA1刺激HMCs后上调的C3aR、C5aR结合，增加HMCs IL-6、MCP-1 表达，C3aRA、C5aRA 可减少其表达。关键词：IgA1人肾小球系膜细胞C3aRC5aR炎症因子IIEffect ofC3aRA、C5aRAon the expressionof IL-6、MCP-1 and proliferation inhuman mesangial cellsstimulatedby IgA1AbstractObjectivesIgA1wasusedtostimulatedhumanmesangialcells(HMCs)inthisstudyto investigatetheeffectsofC3aRAandC5aRAontheexpressionofIL-6,MCP-1and prol