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学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江理工大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江理工大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:也作吨签字日期:2016年5月25日导师签名:tt彩炙签字日期:2016年5月25日本研究由国家自然科学基金青年项目提供资助中文摘要本文在构建家蚕BombyxmoriL.细胞bmo-miR-3378 过表达/抑制表达体系的基础上,采用实时定量PCR技术、生化分析技术和蛋白组测序技术等分析bmo-miR-3378 表达量变化所引发的细胞生物学效应、病毒病理学效应和细胞蛋白组学效应等,以探讨bmo-miR-3378 在家蚕-杆状病毒B.morinucleopolyhedrovirus(BmNPV)互作中的功能作用,结果如下:1. 家蚕bmo-miR-3378的细胞转染与表达分析通过实时定量PCR技术检测发现,家蚕BmN细胞感染BmNPV后bmo-miR-3378表达量显著降低。采用bmo-miR-3378类似物/抑制物转染家蚕BmN细胞,构建bmo-miR-3378 过表达/抑制表达体系。2. 家蚕bmo-miR-3378的细胞生物学效应分析家蚕BmN 细胞中bmo-miR-3378 过表达可导致细胞死亡率显著升高、细胞活力和延展显著降低、以及细胞凋亡水平显著提高;而bmo-miR-3378抑制表达则引发相反的细胞生物学效应。3. 家蚕bmo-miR-3378的细胞病毒学效应分析家蚕BmN 细胞中bmo-miR-3378 过表达可显著抑制BmNPV的复制增殖与感染;而bmo-miR-3378 抑制表达对BmNPV的影响恰正相反。4. 家蚕bmo-miR-3378的细胞蛋白组效应分析家蚕BmN细胞中bmo-miR-3378过表达可导致211个蛋白显著差异表达;而bmo-miR-3378 抑制表达导致160 个蛋白显著差异表达。就预测获得的bmo-miR-3378 潜在靶基因与蛋白组测序得到的差异蛋白进行比对分析,筛选出49个靶基因序列及其相关通路,为后续筛选与细胞免疫相关的靶基因及其涉及的信号传导与代谢通路提供基础。综合本文研究结果,推测BmNPV在感染早期是通过抑制bmo-miR-3378 表达来降低家蚕细胞的凋亡水平,以维持病毒的复制与增殖。杆状病毒这种通过寄主细胞miRNA来I间接调控寄主细胞凋亡的反抗性机制,是通过病毒本身IAPs 直接调控寄主细胞凋亡的反抗性机制的另外补充,尚属首次发现。论文结果为揭示昆虫miRNA免疫调控机制提供理论参考,为miRNA及其靶基因生物功能的系统分析提供新的技术思路和分析平台,并为家蚕病毒病的早期诊断、开发防病新途径和抗病育种以及家蚕生物反应器的可持续产业化发展提供应用基础。关键词:家蚕,miRNA,bmo-miR-3378,杆状病毒,家蚕核型多角体病毒,细胞凋亡,细胞延展,病毒复制,病毒增殖,蛋白组学,靶基因预测IIAbstractToexplore thefunctionofbmo-miR-3378ontheinteractionbetweenthesilkworm,Bombyx moriL.andthebaculovirus,B.morinucleopolyhedrovirus(BmNPV),cellularbiologicaleffects, viralpathologicaleffects,andcellular proteomiceffectsofbmo-miR-3378expressionchangesin BmNcellswereanalyzedbyusingreal-timequantitativePCR,biochemicalanalysisandprotein sequencingtechnology, after bmo-miR-3378 expression system wasconstructed.Transfection and expression ofbmo-miR-3378 inBmN cellsTheexpressionofbmo-miR-3378wassignificantlydecreasedinBmNcellsafterinfected byBmNPV.Transfectionofbmo-miR-3378mimicorinhibitorcouldincreaseordecrease significantlytheamount of bmo-miR-3378 in BmN cells.Cellularb

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