asics在酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡中的作用及其线粒体途径机制分析word格式论文.docxVIP

英文缩略词表Abbreviation英文缩写英文全称中文全文AAAdjuvantarthritis佐剂性关节炎ASICsAcidsensingion channels酸敏感离子通道ASIC1aAcidsensingion channel1a酸敏感离子通道1a型AmiAmiloride阿米洛利RA Rheumatoid arthritis类风湿性关节炎MTT methylthiazolyl tetrazolium 四甲基偶氮唑蓝Cyt-C CytochromeC 细胞色素CAOacridine orange吖啶橙EBethidiumbromide溴化乙锭cDNAComplementaryDNA反转录DNAPCRPolymerase chain reaction聚合酶链式反应CRrealtimefluorescencequantitativePCR实时荧光定量PCRRT-PCRreverse transcription-polymerase chainreaction反转录酶-聚合酶链锁反应DMEMDulbecco’smodifiedEagle’smediumDMEM 培养基DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜FCSFetal calf serum胎牛血清ghGramHour克小时mgMilligramme毫克minMinute分NSNormalsaline生理盐水ODOpticaldensity光密度PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PGProtein-polysaccharide蛋白多糖sHEPESSecondN-2-Hydroxyethylpiperzaine-N-ethane秒羟乙基哌嗪乙硫磺酸OPTI-MEMReducedserummedia低血清培养基PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride蛋白酶抑制剂SDSSodiumdodecylsufate十二烷基硫酸钠PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳APAmmoniumpersulfate过硫酸铵BpBasepair碱基对rpmRevolutionperminute转/分ECMExtracellularmatrix细胞外基质PVDFPolyvinylideneFluoride聚偏二氟乙烯Rh123Rhodamine123罗丹明123CatKCathepsinK组织蛋白酶KCoIICollagenIIII 型胶原MMPMitochondrial membranepotential线粒体膜电位TUNELTerminal-deoxynucleoitidylTransferaseMediatedNickEndLabeling末端标记法PTPpermeabilitytransitionpore通透性转化孔Apaf-1Apoptoticproteaseactivatingfactor-1凋亡蛋白酶激活因子-1 NOnitric oxide一氧化氮ASICs在酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡中的作用及其线粒体途径机制研究研究生荣超导师陈飞虎教授(安徽医科大学药学院，合肥，230032)中文摘要背景：类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种不明病因的临床综合征，以慢性多关节炎症为主要表现，由于炎症导致关节局部组织酸化，关节腔内滑液pH显著下降。酸敏感离子通道(Acid-sensingionchannels,ASICs)是一类配体门控性离子通道,属上皮钠通道(EnaC) /退化因子基因(DEG)通道家族中的一个成员,能被细胞外pH下降或H+浓度上升激活。本课题组前期研究证实在佐剂性关节炎(AdjuvantArthritis，AA)大鼠关节软骨细胞上有ASICs的表达，并参与病理情况下的关节软骨代谢过程。目的：本研究以体外培养的大鼠关节软骨细胞为实验对象，采用不同程度的胞外酸化刺激大鼠软骨细胞凋亡，观察ASICs阻断剂阿米洛利(Amiloride)对大鼠软骨细胞凋亡的影响，以探讨ASICs在大鼠软骨细胞凋亡过程中的作用及其可能的分子机制。方法：1. 采用Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞，将细胞分为四组分别在pH为7.4、6.5、6.0、5.5的培养基孵育，建立关节软骨细胞凋亡体外模型，MTT法检测不同程度酸化刺激对软骨细胞生存率的影响，Hoechst染色法和AnnexinV/PI 双标记法分别观察软骨细胞凋亡形态和