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优秀毕业论文 精品参考文献资料 Alteromonas sp. A321 产浒苔多糖降解酶及酶学性质研究 摘要 浒苔多糖是一种由鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸组成并含有硫酸基的聚阴离 子糖链。近年来，因其特殊的结构、较好的生物活性和广泛的生物来源，受到 越来越多人的关注。浒苔多糖降解酶是指可以将浒苔多糖降解为小分子寡糖的 一种酶，该酶的首次发现是对现有海藻工具酶种类的丰富和完善。本论文对浒 苔多糖降解酶产生菌的筛选、鉴定、产酶条件优化、酶的分离纯化和酶学性质 等做了系统的研究。 1. 通过平板初筛和摇瓶复筛，从腐烂浒苔表面筛选出一株高产浒苔多糖降 解酶的菌株，编号为 A321。通过形态学观察、生理生化及 16S rRNA 序列分析 进行菌种鉴定。结果表明该菌株属于交替单胞菌（Alteromonas sp.）。 2. 通过单因素和响应面实验相结合的方法，确定了 Alteromonas sp. A321 发 酵产酶的最适培养条件为：初始 pH 7.3，摇瓶装液量 75 ml/250 ml，接种量 8%，培养温度 28 oC；最佳培养基组成为：浒苔多糖 0.93%、硝酸钠 0.41%、氯 化钠 1.03%、MgSO4 0.10%，K2HPO4 0.40%。在最佳培养基组分和培养条件下 发酵 48 h，酶活为 0.744 U/ml。发酵产酶曲线结果表明该菌株在 36 h 时产酶量 最高，为 0.753 U/ml。酶解实验证明该酶可以高效降解浒苔多糖，酶解 7 h 后还 原糖得率达到 63.53%。 3. 对菌株 Alteromonas sp. A321 产生的浒苔多糖降解酶进行硫酸铵沉淀、 DEAE-CL-6B、DEAE-FF、Q-FF 离子交换层析、Sephacryl S-100 HR 凝胶过滤 层析，获得两种电泳纯的浒苔多糖降解酶，分别命名为酶 L1 和 L2。酶 L1 和 L2 的纯化倍数分别为 35.78、42.35，比活分别为 19.32 U/mg、22.86 U/mg。电 泳结果表明酶 L1 的分子量为 76.4 kDa，酶 L2 的分子量为 102.5 kDa。经测定， 酶 L1 的 N-端氨基酸序列为 A-N-P-A-A-P-G-E，BLAST 比对结果表明酶 L1 为 一种新酶；未能测出酶 L2 的 N-端氨基酸序列。 I 4. 对纯化的酶 L1 和 L2 的酶学性质分别进行研究，结果表明，酶 L1 和酶 L2 的最适反应温度分别为 35 oC 和 30-35 oC，最适 pH 分别为 7.0 和 6.0。 Na+和 K+对酶 L1 和酶 L2 的活性没有影响； Zn2+、Hg2+、Cu2+、Co2+、Al3+对酶 L1 和 酶 L2 均有抑制作用。低浓度的 SDS 促进酶 L1 和 L2 的活性，而高浓度的 SDS 抑制酶 L1 和 L2 的活性。邻菲罗啉促进酶 L1 的活性，抑制酶 L2 的活性。酶 L1 和酶 L2 的 Vmax 分别为 8.87 μmol/min/ml，2.99 μmol/min/ml；Km 分别为 46.69 mg/ml，3.37 mg/ml。酶解产物的质谱分析表明酶 L1 的降解产物为酸性寡糖片 段；酶 L2 的降解产物为中性寡糖片段。 该酶在研究浒苔多糖的构效关系和实现浒苔的高值化利用有广泛前景，并 且该酶可用于制备低分子量浒苔寡糖。相对于目前采用的物理降解法和化学降 解法，酶解法不需要复杂的实验设备，也不会对环境造成污染。因此，获得高 活力产酶菌株并完成酶的性质研究具有重要的理论和现实意义。 关键词：浒苔多糖、Alteromonas sp. A321、降解酶、筛选、分离纯化、酶学性 质 II Study of degradases for polysaccharides from Enteromorpha prolifera produced by Alteromonas sp. A321 Abstract Polysaccharides from Enteromorpha prolifera (PE) are recognized as one kind of polyanion polysaccharides and composed of rhamnose, xylose, glucuronic acid, and some sulfate. Recently, PE are becoming increasingly popular due to their unique structural features, bioactivity, and abundant source. Degradase for polysaccharides from E. prolifera (